ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的生物化学检测方法，用于测定样本中的特定抗原或抗体。为了确保实验的准确性和可靠性，ELISA样本的收集、处理和保存需要遵循严格的步骤。不同类型的样本处理方法如下：

1、血清样本处理

1) 采集：使用无热原、无内毒素的试管或离心管收集全血，室温下静置1-2小时或4℃过夜，让血液自然凝固。

2) 分离：将试管或离心管以1000×g离心20分钟，小心收集上层血清。

3) 保存：血清应避免反复冻融，保存在-20℃或-80℃，短期可存于2-8℃冰箱，但不宜超过24-48小时。

2、血浆样本处理

1) 采集：使用含抗凝剂的采血管或离心管（如EDTA、肝素或枸橼酸钠）采集血液，混合均匀。

2) 分离：采集后30分钟内，4℃下以1000×g离心15分钟，收集上层血浆。

3) 保存：血浆保存条件与血清相同，避免反复冻融。

3、细胞培养上清样本处理

1) 收集：直接收集细胞培养上清液，离心20分钟（1000×g），去除细胞碎片和杂质。

2) 保存：立即分装，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

4、细胞裂解液样本处理

1) 消化：用胰蛋白酶消化贴壁细胞，再用培养基冲洗。

2) 裂解：收集细胞，用PBS洗涤后，加入蛋白酶抑制剂重悬，可通过反复冻融或超声处理裂解细胞。

3) 离心：4℃下以1500×g离心10分钟，收集上清液。

5、组织匀浆样本处理

1) 清洗：用PBS冲洗组织，去除表面血液和杂质。

2) 匀浆：称重后，加入适量PBS（1:9重量体积比），用匀浆器在冰上或冰浴中充分匀浆，可额外超声或冻融裂解。

3) 离心：2-8℃下以5000×g离心5-10分钟，收集上清液。

6、特殊样本处理

1) 唾液：在2-8℃下4000×g离心10分钟，收集上清。

2) 尿液：离心15-20分钟（1000×g），收集上清。

3) 粪便：采集干粪便，加入PBS匀浆后离心。

通用注意事项:

避免溶血：溶血会导致非特异性显色，影响结果。

防菌污染：细菌可能含有内源性HRP，导致假阳性。

蛋白酶抑制剂：长期保存时可添加，保护蛋白。

避免反复冻融：每次冻融都会损伤蛋白，应分装保存。

轻柔操作：混匀样本时避免剧烈振荡，以防气泡和蛋白变性。

样本保存:

短期：2-8℃，不超过48小时。

长期：-20℃或-80℃，避免反复冻融。 

遵循这些标准操作程序，可以最大限度地减少样本处理过程中的误差，确保ELISA检测的准确性。