测任何目标蛋白的抗体不止一种,同一家抗体公司可能有好几种,甚至几十种。在不同的抗体公司,则更多。那么在眼花缭乱的抗体阵中,如何选择自己实验需要的抗体呢?选择适合实验的抗体需要综合考虑多个因素,包括实验类型、样本种属、抗体的特异性、宿主物种来源以及是否需要荧光标记等。
ELISA试剂盒中HRP底物范围较广,HRP即辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase)比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以最常用。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)的显色原理基于其酶催化作用(氧化作用)。HRP酶标二抗,即辣根过氧化物酶标记的二抗,是生物学实验常规用的二抗。其特点包括比活性高、稳定性好、分子量小、纯酶容易制备等,因此在免疫学实验中广泛应用。HRP底物主要包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。
免疫荧光(IF)是一种用于检测以及识别细胞和组织中蛋白质和其他分子的亚细胞分布和迁移的强大检测技术。IF可用作免疫组织化学 (IHC) 或免疫细胞化学 (ICC) 中使用的传统显色标记的替代物。通过使用多种标记物的二级抗体,可以研究感兴趣蛋白的共定位,这是不能通过常规IHC或ICC实现。这是同时分析许多目标蛋白时的一个优势,可同时生成大量亚细胞定位的准确数据。免疫荧光染色是一种常用的细胞和组织学研究技术,它利用特异性抗体与标记荧光染料结合,来检测和定位细胞中的特定蛋白质或其他分子。