过氧化物酶(Peroxidase，POD)试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体100μL×1支，4℃保存；
试剂三：液体100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
注意：
如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
POD活性计算：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）POD活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =2000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/g 鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =4×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500万。
用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）POD活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD（U/mL）=ΔA×V反总÷V样÷0.005÷T =4000×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD（U/g 鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A470变化0.005为一个酶活力单位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T =8×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细菌或细胞总数，500万。
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资料/datasheet
