葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
测定原理
GOD催化产生H2O2，过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在500 nm有特征吸收峰，颜色深浅与GOD活性成线性关系。
试验中所需的仪器和设备
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
缓冲液：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10mL缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10mL缓冲液充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一个月；
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
3、煮沸样本的准备：取200μL样本至新的EP管中，95℃水浴10min，冷却至室温后，8000g 4℃离心10min，取上清作为对照管的煮沸样本待测。
4、测定操作表
|
试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
|
样本 |
|
50 |
|
煮沸样本 |
50 |
|
|
试剂一 |
75 |
75 |
|
试剂二 |
75 |
75 |
混匀，35'C保温15min后，于500nm波长处读取吸光度。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
GOD活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
回归方程为y = 2.8348x - 0.0169；x为H2O2标准品浓度（μmol/mL），y为ΔA。
1、血清（浆）GOD活力的计算
单位定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷V样÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/g鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反总：反应体系总体积，0.125mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
回归方程为y = 1.4174x - 0.0169；x为H2O2标准品浓度（μmol/mL），y为ΔA。
1、血清（浆）GOD活力的计算
单位定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷V样÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)
2、细菌、细胞或组织GOD活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(V样×Cpr) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/g鲜重）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(W×V样÷V样总) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol H2O2为一个酶活力单位。
GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反总÷(500×V样÷V样总) ×1000÷T
=0.235×(ΔA+0.0169)
V反总：反应体系总体积，0.125mL； V样：加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，15 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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资料/datasheet
