酸性磷酸酶（ACP）活性测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
测定原理：
在酸性环境中，ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
自备仪器和用品：
酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体60 mL×2瓶，4℃保存。
试剂二：液体50 mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体50 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
测定：
1. 酶标仪预热30 min，调节波长到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列试剂
|
试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
|
样本 |
10 |
10 |
|
试剂一 |
90 |
990 |
|
试剂二 |
900 |
|
|
30℃避光保温30 min |
||
|
试剂三 |
400 |
400 |
混匀，吸取 200µL 加入96 孔板中，405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定管-A对照管。
注意：每个测定管需做一个对照管。
ACP活性计算：
标准曲线 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性计算
活性单位定义：30℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V反总÷T÷V样
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(V样×Cpr)
=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反总÷T÷（细胞数量×V 样÷V 样总）
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷细胞数量
V反总：反应体系总体积（mL），1 mL； W ：样品质量，g； V样：加入反应体系中样本体积（mL），0.01 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），30 min；500：细胞或细菌总数，500万。
注意事项：
ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
扫描二维码
扫描二维码
资料/datasheet
