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蔗糖含量测试盒(比色法)
AS6321217
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蔗糖(sucrose)含量试剂盒说明书

微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。

测定原理:

先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100ml×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体2ml×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体 20ml×1瓶,4℃保存;

试剂四:液体 6ml×1瓶,4℃避光保存;

试剂五:粉剂0.5g×1瓶,常温保存。

蔗糖提取:

称取0.1~0.2g样本,常温研碎,加入0.5mL提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃水浴锅中10min,振荡3~5次,冷却后,4000g,常温离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入0.5mL提取液,冷却后,4000g,常温离心10min,取上清液测定。

测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
  2. 样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂(μL)

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

25

试剂一

 

25

 

蒸馏水

25

 

 

试剂二

15

15

15

   混匀,沸水浴煮沸5min左右(盖紧,防止水分散失)

试剂三

175

175

175

试剂四

50

50

50

混匀,沸水浴30min,冷却后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。空白管和标准管只要做一管。

蔗糖含量计算:

1、按照蛋白质含量计算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、按照样品质量计算

蔗糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。

C标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

注意:最低检测限为100ng/g鲜重或1ng/mg prot

 

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