滤纸酶（Filter paper Activity，FPA）试剂盒说明书
微量法100T/48S
测定意义
纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖，研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。
测定原理
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的活力。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体40mL×1瓶，4℃保存。
滤纸条：50mg×50条。
酶液提取
测定操作
酶活性计算公式
标准曲线：y = 0.2805x - 0.0255，R2 = 0.9991
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/mg prot）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反总÷（V样×Cpr）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每克组织每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/g）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ W
（3）按液体体积计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每毫升培养液每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/mL）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反总÷V样÷T
= 0.891×（△A+0.0255）
（4）按细胞数量计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/104cell）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反总÷（V样×细胞数量（万个）÷V样总）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ 细胞数量（万个）
V反总：反应总体积，1.5mL，V样：反应体系中加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
标准曲线：y = 0.1403x - 0.0255，R2 = 0.9991
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每毫克蛋白每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/mg prot）=（△A+0.0255）÷ 0.1403×V反总÷（V样×Cpr）÷T
=1.782×（△A+0.0255）÷ Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每克组织每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/g）=（△A+0.0255）÷ 0.1403×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 1.782×（△A+0.0255）÷ W
（3）按液体体积计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每毫升培养液每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/mL）=（△A+0.0255）÷ 0.1403×V反总÷V样÷T
= 1.782×（△A+0.0255）
（4）按细胞数量计算
酶活性定义：在50℃，pH4.6条件下，每104个细胞每分钟分解滤纸产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
FPA（U/104cell）=（△A+0.0255）÷ 0.1403×V反总÷（V样×细胞数量（万个）÷V样总）÷T
= 1.782×（△A+0.0255）÷ 细胞数量（万个）
V反总：反应总体积，1.5mL，V样：反应体系中加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min
注意事项
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资料/datasheet
