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土壤纤维素酶(SCL)/羧甲基纤维素酶测试盒(比色法)
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土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书

                                          微量法 100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

测定原理:

采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品:

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸(不允许快递)和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:甲苯10mL×1瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存;

试剂三:液体40mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存; 临用前加入5mL蒸馏水和45mL浓硫酸充分溶解待用。

样品处理:

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。

加样表和测定步骤:

 

对照管

测定管

风干土样(g)

0.05

0.05

试剂一 (μL)

50

50

振荡混匀15min

试剂二(μL )

 

90

试剂三(μL )

370

370

蒸馏水(μL )

180

90

37℃振荡反应3h后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后

8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μL)

140

140

试剂四 (μL)

260

260

混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,测620nm下吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-CL活力计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

单位的定义:每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)

T:反应时间,3h=1/8d; V反总:反应体系总体积:0.6mL;W:样本质量,0.05g。

b.96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 2.5090x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

单位的定义:每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反总÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)

T:反应时间,3h=1/8d; V反总:反应体系总体积:0.6mL;W:样本质量,0.05g。

 

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