| 货号 | 规格 | 目录价 | 会员价 | 库存 | 数量 | 购买 |
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| AP3008-50T | 50T | ¥3490.00 | 登录查看 |
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【检测原理】
本试剂盒根据荧光 PCR 技术原理，针对 PCR试剂盒设计特异性引物和 Taqman 探针，通过荧光 PCR 检测仪进行检测，从而实现对 PCR试剂盒的检 测。
【储存条件及有效期】
1．避光-20℃储存，有效期 12 个月。
2．低温运输不能超过 4 天；开封后避光-20℃储存，对有效期没有影响。避免反复冻融，冻融 6 次不影响检测效果。
3．生产日期、有效期至：见外包装盒。
【适用仪器】
适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。
【样本要求】
1．样本种类：鼻/咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液；培养物等样品。
2．保存条件：采集的标本应及时送检，24 小时内检测的应 4℃保存，超过 24 小时的最好-70℃保存，并避免反复冻融。
【检测方法】
1 ． 试剂准备（试剂准备区）
将试剂盒各组分置 4℃避光融化，充分混匀后瞬间离心。计算试剂使用份数 N（N=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照），根据下表配置反应体系mix，加入一适当体积离心管中，充分混匀后瞬间离心，按 20μL 分装至 PCR 反应管/板，并转移至样本处理区。
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组分 |
体积（μL ） |
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qPCR 预混液（含酶） |
16 |
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引物探针 |
4 |
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总体积（反应体系 mix ） |
20 |
2 ． 样本处理（样本处理区）
① 核酸提取
选择合适的核酸提取试剂盒提取核酸，具体按照相应的试剂盒说明书操作。
② 加样
在已加入反应体系 mix 的 PCR 反应管/板上分别加入处理好的待检标本核酸、阴性对照、阳性对照各 5μL，终体积为 25μL。
盖紧管盖或封膜，瞬间低速离心后置荧光 PCR 检测仪扩增。
3 ． 扩增检测（核酸扩增区）
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步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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①预变性 |
95℃ |
5min |
1cycle |
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②变性 退火/延伸/检测荧光* |
95℃ 55℃ |
10s 40s |
40cycles |
*步骤②中 55℃时荧光检测，检测通道为 FAM。*ABI 系列荧光 PCR 仪不选 ROX 校正，淬灭基团选 None。
4 ． 结果分析根据分析后图像调节起止值，（建议起始设在 3～15、终止设在 5～20，同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击分析，在报告界面查看结果。
【质量控制】
1．阴性对照：Ct 值＞38 或未检出。
2．阳性对照：扩增曲线呈 S 型，且 Ct 值≤30。
3．同一实验以上要求需同时满足，否则本次实验视为无效。
4．每种检测靶标都需设阴阳对照，不同的靶标根据对应阴性调整基线阈值。
【结果判读】
1．FAM 通道检测 B 组链球菌。
2．阴性：Ct 值＞38 或未检出。
3．阳性：扩增曲线呈 S 型，且 Ct 值≤35。
4．可疑：扩增曲线呈 S 型，且 35＜Ct 值≤38，需复检；复检结果若一致，判定结果为阳性。
【检验方法的局限性】
1．样品采集、运输、保存不当，试剂运输、保存、配置不当都可能会影响实验结果，甚至会导致假阴性结果。
2．如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染，可能出现假阳性结果。
【注意事项】
1．PCR 操作各阶段应严格分区操作，避免交叉污染。
2．试剂盒各组分使用前应充分融化混匀，离心数秒后使用。
3．各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4．待测标本若不及时检测，应保存于-20℃或-70℃。
5．样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6．PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7．本试剂盒仅用于科研使用，不做为临床诊断使用。
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