脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并在不同的组织表现出不同的生理意义。
测定原理
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制
试剂一：液体105mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
样品处理
测定操作
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对照管 |
测定管 |
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样品（μL） |
20 |
20 |
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试剂一（μL） |
80 |
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试剂二（μL） |
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80 |
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混匀，45℃水浴10min |
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试剂三（μL） |
100 |
100 |
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充分混匀，25℃静置2min，于微量石英比色皿/96孔板，测定400nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管- A对照管 |
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计算公式
标准曲线：y= 0.0581x -0.0169，R2=0.9982
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.0581×V反总÷（V样×Cpr）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/g 鲜重）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V反总÷V样÷T
= 17.21×（△A+0.0169）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.029x -0.0169，R2=0.9982
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.0169）÷ 0.029×V反总÷（V样×Cpr）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/g 鲜重）=（△A+0.0169）÷0.029×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每104个细胞每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
=34.42×（△A+0.0169）÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1μmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。
LPL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.029×V反总÷V样÷T
= 34.42×（△A+0.0169）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min
注意事项
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资料/datasheet
