土壤外切-β-1，4-葡聚糖酶/纤维二糖苷酶（S-C1）活性测定
试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
C1（EC3.2.1.91）存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。
测定原理：
采用3,5－二硝基水杨酸法测定S-C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：
酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；
样品测定的准备：
称取约0.1g新鲜土样或风干土样，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，室温振荡提取30min，然后10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
2、加样表（在EP管中依次加入下列试剂）：
|
试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
|
样本 |
10 |
10 |
|
试剂一 |
100 |
|
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蒸馏水 |
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100 |
混匀，37℃准确水浴2h
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试剂二 |
200 |
200 |
混匀， 90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测540nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
S-C1活性计算
标准条件下测定回归方程为y = 6.4078x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每g土样每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g；
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为y = 3.2039x - 0.0673；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-C1活力(μg /min /g鲜重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反总]÷(W× V样÷V样总) ÷T
=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W
1000：1mg/mL=1000ug/mL；V反总：反应体系总体积，0.11mL； V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，120 min； W：样本质量，g。
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资料/datasheet
