土壤多酚氧化酶（Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，用于土壤环境修复。
测定原理：
S-PPO能够催化邻苯三酚产生有色物质，后者在430nm有特征光吸收。
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、乙醚50mL（不允许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前取一瓶，加入7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存一周。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：乙醚50mL×1瓶，4℃保存；（自备）
样品处理：
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
测定步骤：
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试剂名称 |
测定管 |
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风干土样（g） |
0.02 |
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试剂一（μL） |
120 |
振荡混匀，30℃恒温培养1 h
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试剂二（μL） |
50 |
|
试剂三（μL） |
430 |
振荡数次，室温静置30min，取200μL上层液于430nm处测定吸光值A。
（注意：1、因乙醚粘度小，易掉液，吸取前需先将枪头在上层液里润洗2~3次，再转移测定；2、乙醚易挥发，转移到96孔板后立即测定，最好一个一个测定）。
S-PPO活力计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 8.97x -0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO活力（mg /d/g 土样）＝(A+0.003) ÷8.97×V反总÷W÷T=80×(A+0.003)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积0.6mL；W：样本质量，0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 4.485x -0.003；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值A。
单位的定义：每天每g土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO活力（mg/d/g 土样）＝(A+0.003) ÷4.485×V反总÷W÷T=160×(A+0.003)
T：反应时间，1h=1/24d； V反总：反应体系总体积0.6mL；W：样本质量，0.02g。
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资料/datasheet
