土壤淀粉酶（Soil Amylase，S-AL）试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
淀粉酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物，是一种重要的酶制剂，广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。
测定原理
淀粉酶水解淀粉产生还原糖，可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质，在508nm处有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
需自备的仪器和用品
天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。
试剂的组成和配制
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。若出现沉淀析出，需70℃加热溶解后再用。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃保存。
测定操作表
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对照管 |
测定管 |
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土样（g） |
0.02 |
0.02 |
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甲苯（μL） |
10 |
10 |
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25℃静置15min |
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试剂一（μL） |
110 |
50 |
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试剂二（μL） |
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60 |
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充分混匀，37℃震荡1h，8000rpm，25℃，离心10min |
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上清液（μL） |
100 |
100 |
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试剂三（μL） |
100 |
100 |
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充分混匀，90℃水浴5min，待冷却后，于微量石英比色皿/96孔板中测定508nm吸光值，分别记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管。 |
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计算公式
标准曲线：y = 0.2525x - 0.034，R² = 0.9917
酶活单位定义：每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。
S-AL（mg/d /g 鲜重）=（△A +0.034）÷ 0.2525×V反总÷W÷T
= 10.464×（△A +0.034）÷W
V反总：反应体系总体积，0.11mL；T：反应时间，1/24d；W：样本质量，g。
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1263x - 0.034，R² = 0.9917
酶活单位定义：每g土样每天催化生成1mg还原糖为一个酶活力单位。
S-AL（mg/d/g）=（△A +0.034）÷ 0.1263×V反总÷W÷T
=20.928×（△A +0.034）÷W
V反总：反应体系总体积，0.11mL；T：反应时间，1/24d； W：样本质量，g。
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资料/datasheet
