土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）
试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。
测定原理：
S-LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。
自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体35mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
S-LAP测定步骤：
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试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
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新鲜土样（g） |
0.05 |
0.05 |
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试剂一（μL） |
300 |
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试剂二（μL） |
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300 |
混匀， 37℃振荡反应1h后，8000g 4℃离心10min，取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-LAP活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
单位的定义：每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V反总÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
单位的定义：每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。
S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V反总÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA
V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。
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资料/datasheet
