分子生物学实验室里，PCR试剂盒归属基础工具范畴，然而，当面对市面上满是琳琅品牌及众多型号的状况，怎样去挑选契合自身实验的试剂盒，又怎样保证实验结果稳定可靠起来，这是好多科研人员于实际工作里没法避开的问题。本文依据实验室实际操作经验，从试剂盒选择型号方面、实验操作关键要点方面以及常见问题处理这三个方面，整理出一套实用的思路跟方法。

如何根据实验类型选试剂盒

做不同实验，对PCR试剂盒的要求差异极大。普通PCR扩增，只需基础型试剂盒，其包含Taq酶、dNTPs以及反应缓冲液便足矣。要是做荧光定量PCR，那就必须选专门的qPCR试剂盒，此类产品中预混了荧光染料或者探针体系，可实时监测扩增过程。而对于多重PCR检测，得选购支持多靶标同时扩增的试剂盒，这类产品在引物设计以及酶体系方面做了特殊优化。于购买之前，需先弄清楚自身所进行的实验究竟是属于定性检测范畴或是定量分析范畴，是仅仅针对单一靶标还是涉及多重检测，而这样的一种判断会对试剂盒选型产生直接的影响。

核心组分对结果的影响有多大

在试剂盒里，酶的性能，直接用以敲定扩增效率以及特异性。高保真酶，适用于克隆以及测序等，对于序列准确性有着高要求的实验，然而普通Taq酶，更适宜常规检测。缓冲液的成分，同样是很关键的，有些试剂盒，提供出去的是即用型预混液，仅仅只需加入引物和模板，便能够上机，这类产品，操作起来甚是简便，不过价格却是偏高的；另外有些是采用分开包装方式，用户能够依据实验需求，灵活改变镁离子浓度等参数。要加以留意的是，不同品牌的试剂盒，其扩增速度存在显著差异，快速型的试剂盒，能够把扩增时间缩短到30分钟以内，然而，可不是所有的模板都适用它。

实验重复性差该怎么排查

实际操作之时，重复性欠佳乃是最为常见的问题所在。首先得从试剂盒保存这一环节着手，酶类组分务必要严格予以保存在零下二十摄氏度之处，反复进行冻融的话将会致使酶活出现下降的情况。加样环节所存在的误差同样是不能够被忽视的，建议把预混液依照所需反应数提前配制成混合体系后，再分装至各个反应管当中，如此这般能够在最大程度上减少加样所产生的差异。要是使用荧光定量PCR的话，还需要去检查孔间是不是存在气泡，气泡会对荧光信号采集造成干扰。质量属于关键变量范畴的模板，提取后的核酸要进行纯度以及浓度的检测，以此保证A260/A280比值处于1.8至2.0这个区间之内。

预混液能否替代分装体系

预混液的现身的确让实验操作得以简化，然而并非适用于所有情形。针对样本量多的筛选实验而言，预混液能够明显提高效率且降低污染风险，属于首选办法。但在对实验条件予以优化时，分装体系反倒更为灵活，能够单独调节引物浓度、镁离子浓度等参数。需格外注意的是，部分荧光定量预混液当中已含有参比染料，要是自行额外进行添加反而会对仪器校准造成干扰。选择何种形式，取决于实验阶段是方法开发还是常规检测。

有没有在实际的实验里头，碰到过PCR的结果处于不稳定状态，或者出现非特异性扩增这种状况呢？最终选用了何种办法去把它给解决掉的呀？