PCR纯化试剂盒，那可是分子生物学实验室常常会用到的工具，它能用来把PCR反应体系里的引物、dNTP、酶以及盐离子给去除掉，进而回收得到高纯度的DNA片段。正确地去选择以及使用这类试剂盒，会直接对下游克隆、测序或者酶切实验的成败产生影响。

如何选PCR纯化试剂盒

进行选择之际，首要关注的是回收片段的大小范围，不同的试剂盒对于DNA片段具备特定的结合能力，一般覆盖的范围是从100bp到10kb，然而存在一些试剂盒对于小于100bp的短片段，其回收率是比较低的。其次要考量回收效率以及洗脱体积，具备高回收率的试剂盒能够减少珍贵样本的损耗，而洗脱体积低则会直接提升产物的浓度。另外还需要留意试剂盒的类型，离心柱型和磁珠型各有各的优势与劣势，离心柱型操作较为简单，不过需要离心设备，磁珠型则更适宜自动化平台。

PCR纯化试剂盒使用步骤

以最为常用的离心柱型作为示例，第一步是进行结合，具体为把PCR产物跟结合缓冲液按照某一比例予以混合，以此让DNA能够选择性地吸附至硅胶膜之上。第二步着手洗涤，也就是运用含有乙醇的洗涤缓冲液去把杂质尽数去除掉，在这一步特别要保证洗涤液能够完全透过柱子，一般情况下会进行离心操作，时长为1分钟。第三步开展洗脱，即朝着柱子的中央加入洗脱液或者去离子水，在静置1至2分钟之后再次进行离心，进而让DNA完完全全地溶解下来。整个的流程大约10分钟便能够完成。

PCR纯化试剂盒注意事项

洗涤步骤里残留的乙醇，是下游实验中常见的干扰源头；在离心收集洗脱液之前，建议再多离心1分钟，以此彻底去除乙醇，不然的话就会抑制后续的酶促反应；洗脱液的pH值，同样会对回收效率造成影响，其中选择Tris缓冲液，在pH8.0 - 8.5时最为适宜，而用水进行洗脱的时候，需要留意其pH是否稳定；倘若回收的片段小于100bp，就应该挑选专门针对短片段进行优化的试剂盒，普通的产品，可能存在结合力不够的情况；操作期间要避免交叉污染，每次都要更换吸头，并且使用无菌的耗材。