生物实验室里，细胞培养这项功夫，它既是最基础的，又是极其考验手上功夫的。好多人以为，只要培养基添加正确，温度设置妥当就可以。然而，事实上真正有过细胞培养经历的人都清楚，操作时的习惯以及环境方面诸多细节，才是决定这件事成功或者失败的关键因素。

细胞培养前的准备工作

进行培养之前的准备工作常常受到低估，超净台起码要提前开启紫外进行照射半小时，台面需使用75%酒精认真擦拭，所有的移液管、培养瓶以及枪头都得提前放置进台内，我有着把试剂依照使用顺序摆放的习惯，以此防止在操作过程中出现手忙脚乱的情况，环境的温湿度同样会对培养效果产生影响，在夏天湿度较高的时候，培养皿的盖子容易凝结水珠，这就需要对操作节奏加以调整。

细胞培养如何保证无菌

细胞培养的生命线是无菌操作，每次操作前需用酒精喷手，手套要勤更换，火焰灭菌时，瓶口过火两三秒即可，时间太长会损坏瓶口密封圈，移液管用一次就要换，千万别为省耗材而重复使用，我见过不少污染案例，其原因都在于操作时说话、打喷嚏，或者手臂在敞口容器上方经过。

细胞培养状态怎么判断

凭形态去看状态最为直观，状态的好坏取决于形态。对于贴壁细胞而言，若其伸展良好、边缘清晰且透亮，那就表明细胞存活舒适、状态良好；要是细胞变得圆形、边缘发黑且漂浮增多，这就意味着细胞状态在变差、下滑了。传代时密度必须把握精准，密度太稀细胞生长态势不佳、不愿意生长，而密度太密细胞又易于老化。通常，我会在细胞长到大约八成的时候进行传代操作，因为处于这个时候的细胞活力是最强劲充实的，开展相关实验所获得的数据也更为稳定确切。

细胞培养污染怎么处理

一旦察觉到培养基呈现浑浊状态，pH值发生颜色改变，并且在显微镜下出现小黑点状物体，基本上就能够判定是受到污染了。细菌造成的污染在当天便能够被察觉出来，霉菌造成的污染则需要两到三天时间，支原体造成的污染最为隐匿。遇到这种情形时不要迟疑，应当将整批培养物直接丢弃，经过84消毒液浸泡之后再进行处理。培养箱必须要进行彻底的消毒，所有试剂都要重新配置，宁可多花费几天时间，也不要留存隐患从而对后续实验产生影响。

你于细胞培育进程当中遭遇过哪一种最难搞的污染，那时是怎样去处理的呢？