在分子生物学相关实验里头，PCR纯化试剂盒属于连接扩增以及下游实验的关键桥梁。面对市面上种类繁多的产品，怎样选对试剂盒，又怎样用好试剂盒，这直接对测序、克隆等后续实验的成败产生影响。在此结合多年实验操作积累的经验，跟大家讲讲那些说明书上没明确表述，但实际上极其重要的细节。

如何确保高纯度

磁珠或离心柱对对核酸的选择性结合，乃是纯度要核心所在。不少用户察觉纯化后产物存有抑制剂残留，常常是缘洗涤步骤太过草率所致。一定要保证洗涤缓冲液于柱膜上充分停留一-两分钟 ，使得乙醇等杂质被完全洗脱。针对微量样本，选用磁珠法能够最大程度减少样本损失，与此同时借助两次洗涤步骤来提高纯度，这对于后续的荧光定量PCR特别要紧。

洗脱体积有什么讲究

洗脱效率可不是单纯依照“体积越大产量越高”的那种规律。当洗脱液体积比15微升还要低的时候，因为膜表面张力起的作用，液体有可能没办法完全覆盖住膜区域，致使回收率一下子大幅下降。与之相反，要是体积超过了50微升，虽说能够完全浸润膜，但产物却被过度稀释了。对于那些需要高浓度的样本而言，建议采用分步洗脱的方法：先使用20微升洗脱液孵育5分钟之后收集起来，接着再用10微升进行二次洗脱，如此一来往往能够得到理想的浓度与总量的平衡状态。

如何匹配不同样本类型

对应不一样的样本类型，选品牌逻辑有着明显的差别。在处理百微克等级的高丰度扩增产物之际，常规离心柱试剂盒依靠快速便捷的长处就能够胜任。然而当碰到石蜡包埋组织得来的、环境样本这类复杂模板时，其扩增产物常常带有更多抑制剂，此时磁珠法试剂盒的“多次洗涤”优势就显现出来。另外，对于打算开展三代测序的长片段产物，一定要确认试剂盒对长链DNA的回收偏好性，防止短片段富集造成数据偏差。

试剂盒可以这样保存

多数用户惯于把所有组分一同冷藏，然而这般实际上是个错误认知。含有蛋白酶K或者特定酶类的混合液，反复冻溶就会致使活性降低。正确的做法是把洗涤缓冲液、结合液这类盐溶液在常温下避光存放，唯有将酶混合物以及磁珠悬液分装以后进行冷冻。每次实验之前仅取出单次使用量，如此能够有效延长整盒试剂的使用期限。另外，要留意检查磁珠是不是有沉降结块，使用之前一定要涡旋震荡直至完全均匀。

于实际操作期间，你有没有碰到过，因试剂盒选取不恰当，致使实验反复出现的情形呢？欢迎来分享你的经验，让大家一块儿探讨更高效地使用技巧。