首次培养的细胞，是从机体取出后的原代细胞，此细胞在形态方面、功能层面上，与体内状态是最为接近的，它是基础研究里最常用的实验模型。然而，这类细胞对于操作环境以及手法的要求是极高的，稍微有一点不注意，便会对活性造成影响，甚至会致使实验失败。那下面依据实验室常见问题，来聊聊分离培养当中的几个关键环节。

原代细胞是什么

有不少新手易于将原代细胞跟细胞系弄混，原代细胞是直接源自动物或者人体组织的，没有经过多次传代，保留着来源组织特有的功能以及标志物，像从肝组织分离出来的肝细胞，依旧具备代谢酶活性，而从乳腺组织分离出来的上皮细胞，是保留激素响应能力的，这种特性让其在机制研究里不可替代，不过同时也表明它更为“娇贵”。

原代细胞如何培养

决定成败的第一步是分离过程，组织剪碎后要用特定酶消化，消化时间得严格把控，时间过短细胞数量不够，过长会损伤细胞膜，像胰蛋白酶，在37度水浴中消化10到15分钟较常见，不过不同组织差异明显，终止消化后要用完全培养基轻柔吹打，要注意力度，防止产生气泡冲击细胞。

原代细胞质量怎么控

纯化环节不能忽视，鉴定环节同样不能忽视。消化后的细胞悬液里头含有多种细胞类型，能用差速贴壁法进行富集，也能用密度梯度离心法进行富集。若要分离成纤维细胞的话，利用它贴壁快的特性，可在30分钟之后，把未贴壁的上皮细胞给转移到新的皿中。鉴定的时候，除了要观察形态之外，还得用免疫荧光检测特异性标志物，或者用流式细胞术检测特异性标志物，以此来确保纯度能够达标。

原代细胞用在哪

培养进程里的环境维系属于持续不断的挑战，这类细胞对于培养基成分敏感，一般需要添加百分之十至百分之二十的胎牛血清，并且补充谷氨酰胺以及生长因子，培养箱的二氧化碳浓度、温度波动，还有操作台的无菌状态，任何一个细节出现问题都有可能致使细胞老化或者污染，建议构建严格的质控记录，从培养基批次直至操作时间都予以追踪。

你实验室于培养原代细胞之际，最为常遇的难点是组织消化未曾彻底完成，还是传代之后形态出现了变化呢？