原代细胞中的兔原代细胞，在生物研究里作为重要模型，由于其遗传背景均一，还操作性强，常常被运用在各类机理探索方面。怎样去获得活力高且纯度好的原代细胞，这是实验成功的第一步。

分离操作有哪些要点

组织取材要在动物被处死后的30分钟之内完成，以此来防止酶解之前细胞活力出现相应下降情况。剪碎组织之际要维持冰浴状态，采用胶原酶跟胰酶联合起来进行消化，时间把控在40分钟到60分钟这个范围，在这期间要轻柔地摇晃以便助力消化。终止消化之后要快速地过筛，进行三次离心洗涤，从而去除杂质以及碎片。

培养条件如何优化

选择作为最初培养用的基，要用添加了百分之十胎牛血清的那种DMEM/F12，还要补充双抗以及谷氨酰胺。一开始接种时的密度，建议按照每平方厘米2×10⁵个的标准来，然后放置在含有百分之五二氧化碳、温度为37度的恒温培养箱里。第一次进行换液是在24小时之后，目的是把没有贴壁的细胞给去除掉，之后每隔两天换液一回。

常见污染与解决方法

存在细菌污染时，多呈现出培养基迅速变黄的状况，且伴有浑浊现象，这种情况下需即刻将其丢弃，同时要对培养箱展开全面消毒。当出现真菌污染时，会呈现出絮状漂浮物，它相对较难被根除，对此建议重新获取材料。若支原体污染隐蔽，可定期运用荧光染色或者PCR检测，并且要在培养基里添加抗支原体试剂来进行预防。

传代与冻存注意事项

在细胞融合度达到80%这个时候，采用0.25%的胰酶 - EDTA来进行消化，于显微镜下面观察，当细胞变成圆形的时候就终止消化。传代的比例按照1比2或是1比3来开展。冻存液运用血清再加上10%的二甲基亚砜，经过程序降温之后转进液氮里面，复苏的时候进行快速融化，通过离心去除冻存液以此来减少对细胞的损伤。