对于投身生命科学研究领域的科研工作者而言,ATCC细胞是被广泛认可的具备标准化特质的细胞资源,其优势体现在来源清晰明确、背景资料完备周全,能够为实验供应可靠的数据支持。然而在实际进行选购以及完成培养的进程当中,诸多新手会遭遇各式各样的问题,本文会围绕几个至关重要的要点展开详细阐释,助力大家减少不必要的弯路。
怎么选对ATCC细胞株
当着ATCC官网里那满目琳琅的细胞株,新手常常会觉得不知该从哪儿开始着手。挑选的时候头一件得弄清楚实验目的,是去进行药物筛选,还是做基因功能研究,又或者是构建疾病的模型。不同的目的对于细胞的种属、组织来源、生长特性的要求都是不一样的。就好比研究免疫机制,一般会选悬浮生长的免疫细胞;而构建肿瘤模型,就得留意贴壁生长的肿瘤细胞系。
遗传背景以及培养条件的细胞株同样是筛选重点所在,认真查看由ATCC官网所提供的产品说明,去确认细胞的种属来源情况,确认是否属于永生化细胞,确认有无基因突变方面的信息,与此同时,要对实验室现有的条件能不能满足其培养需求作出评估,像有些细胞是需要特定培养基的,有些细胞是需要特定二氧化碳浓度的,有些细胞是需要基质包被的,这些细节对于后续实验的顺利开展有着直接影响。
购买前必须确认的细节
下单之前,在确定好目标细胞株之后,还有几个关键信息得去核实。首先呢,是细胞的代数,ATCC所提供的细胞大多数都是低代数复苏冻存品,这就表明细胞状态更贴近原始特征。但是要留意,从ATCC直接订购以后,不同代理商的库存状况有可能对实际收到的细胞代数产生影响,一定要提前沟通加以确认。
紧接着是与之配套的试剂的预备工作。美国模式培养物集存库会于产品页面清晰地罗列推荐使用的培养基、血清以及添加物。切不可随性地去更换这些配套使用的试剂,不然的话就有可能致使细胞形态发生改变或者生长变得迟缓。要是实验室已然存有一部分试剂,能够预先把产品说明书发给技术人员,让他们帮忙去确认是否相互兼容,如此一来便能够防止因试剂不匹配而造成的损失。
细胞复苏与培养注意事项
接收到 ATCC 细胞之后,复苏的操作乃是决定细胞活性的首个步骤。建议依照 ATCC 官方所给出的复苏方案去执行,采用 37℃的水浴来进行快速解冻,整个流程需掌控在 1 至 2 分钟以内。复苏完成后应当马上运用预热的完全培养基去稀释冻存液,通过离心来去除 DMSO,接着接入培养瓶。操作的进程要柔和,防备机械损伤。
进入到培养阶段之后,建议去建立起详细的细胞日志,记录下每次传代的日期,每次传代的比例,每次传代的形态变化,还有培养箱参数。ATCC细胞对于培养条件的一致性有着较高要求,哪怕是同一株细胞,不同批次的培养操作也应当保持稳定。倘若出现细胞生长速度变化或者形态异常,就应及时去回顾记录,排查是操作问题还是培养环境波动所导致的。
常见问题与解决方案
在细胞的培育进程当中,新手最为忧心的问题便是细胞遭受污染。其中缘由在于,除了细菌以及真菌所造成的污染外,支原体污染更为隐匿,然而却会对实验结果产生极为严重的影响。故而,可以给出建立在定期基础上的建议,也就是运用PCR法或者相关检测试剂盒针对细胞展开支原体检测工作。一旦检测结果显示发现了污染情况,那么务必秉持果断坚决的态度将其弃用,并且要对培养箱以及超净台进行彻底的消毒处理,一定不要怀有任何侥幸心理。
常见的另一个问题是细胞生长得缓慢,这兴许跟传代密度、培养基新鲜程度或者血清批次存在关联,ATCC细胞一般对血清质量颇为敏感,更换血清批次之际应当先进行小规模测试,要是细胞出现老化现象或者形态异常,能够考虑重新从ATCC订购低代数细胞,又或者在实验室搭建种子库,定期去更新工作细胞批次从而维持实验稳定性。
你在选购或培养ATCC细胞时,最棘手的操作环节是哪一步呢?






