在分子生物学实验室里，常用的工具是PCR扩增实验试剂盒，它把复杂的PCR反应所需要的组分预先进行了混合优化，使得实验者只要加入模板和引物就能够上机进行扩增。要是正确地选择并且使用试剂盒，那么就能显著地提升扩增的特异性以及产率，还能避免出现非特异性条带以及拖尾现象。而理解试剂盒各个组分的作用以及操作要点，这是获得可靠数据的前提条件。

PCR试剂盒怎么选

进行挑选之际，首要需考虑的是扩增片段的长度以及GC含量。普通的Taq酶试剂盒适宜用于扩增3kb以内的片段，而高保真酶试剂盒乃为用于那些需要精准扩增的克隆实验。要是模板属于复杂基因组或者拥有高二级结构，那么应当选择添加了增强剂的专用试剂盒。与此同时，要注意热启动酶能够有效地防止低温状况下的非特异性扩增，此乃是提高特异性的关键所在。除此之外，依据下游应用来选择是否带有染料，直接上样电泳的试剂盒能够节省时间。

扩增效率如何提升

受退火温度影响，受引物设计影响，受循环参数影响，扩增效率会发生变化。使用试剂盒推荐的标准程序，通常能够获得良好结果，但是不同的引物，存在需要优化退火温度的情况。建议先进行梯度PCR测试，通过该测试找到最佳温度。除此以外，延伸时间应当充足，一般每1kb片段设置30到60秒。循环数控制在30至35个，过多会致使平台期和非特异性条带出现。模板质量也是至关重要的，降解或含抑制物这样的模板需要进行纯化处理。

操作有哪些注意点

加样动作进行的时候，一定要在处于低温状态的冰上开展操作，以此达到防止酶的活性出现下降这么一种情况的目的。各个组成部分需要做到充分的混合均匀，并且进行短时间的离心操作，以此避免气泡对热传导产生影响。把试剂盒当中的dNTP以及酶进行分装，能够减少反复冻融的情况发生，在使用之前要进行彻底的溶解并且进行涡旋处理。设置阴性对照（也就是没有模板的情况）以及阳性对照（也就是已知模板的情况），用来监控是否存在污染。每一次都要更换移液器上的吸头，这样子才能够避免出现交叉污染这种状况。推荐选用带有滤芯的吸头，这样可以防止因为气溶胶污染从而引发出假阳性的情况出现。

试剂盒怎么保存

大多数PCR试剂盒当中的酶以及dNTP应当长时间保存于零下二十摄氏度，缓冲液能够短期放置在四摄氏度。反复进行冻融将会致使酶活性逐次降低百分之十到百分之二十，建议首次开展使用之后分装成小份。要留意避光进行保存，某些荧光染料组分遇到光容易发生降解。在使用之前需要把各组分完全解冻并且颠倒混匀，千万不要剧烈震荡从而产生泡沫，以免对加样精度造成影响。运输的时候保持干冰环境，收到之后立刻按照说明存放。