用于PCR的相关试剂乃是分子生物学实验的根基所在，其质量对于扩增的成败起着直接决定性作用。从酶开始，一直到引物，再到缓冲液，每一个构成部分都是需要予以严谨评判考量的。接下来，将会从保存、设计以及配制这三个具有关键性质的环节方面，去分享具备实用价值的经验。

试剂如何保存

多数对温度波动颇为敏感的PCR试剂，特别是聚合酶以及dNTP。在收到试剂之后。要依据说明书来进行分区存放：酶通常得在-20℃的环境下避光保存，而预混液是能够短暂放置于4℃的。每次取用的时候必须在冰盒上开展操作，使用完毕后要马上放回冷冻环境。反复冻融是会极大程度降低酶活性的。建议把大包装分装成单次用量的小管，防止整盒反复升温。开封之后的试剂要标注日期，一旦过期或者颜色出现异常（像是dNTP变黄）就应当立刻停用。

引物怎么设计

PCR特异性的决定因素是引物，设计它们的时候，长度管控在18至25个碱基，GC含量为40%至60%，要避免碱基连续重复，3’端最后一个碱基最好选择G或者C，以此增强结合效率，还得使用软件检查是否存有二聚体或发夹结构，因为这些副产物会严重抑制扩增，另外，上下游引物的Tm值相差不应超过2至4℃，这样退火温度才能统一，合成后的引物要用TE缓冲液稀释到100μM作为母液，长期保存同样需要分装冻存。

体系如何配

反应体系的配置需依照“先水后其他”的原则来进行，以此减少气泡以及污染情况的发生。要对各组分的体积做好计算：模板DNA通常在总体系里所占的比例为1%至10%，引物的终浓度处于0.1至0.5μM的范围，dNTP的终浓度是0.2至0.4mM，镁离子（要是使用普通Taq酶的话）的终浓度为1.5至2.5mM。当所有试剂都添加完毕后，需轻轻弹击使其混匀，接着进行短暂的离心操作。建议设置没有模板的阴性对照以及已知的阳性对照，借助这两者来判断扩增是否具备可靠性。倘若配制好的反应板无法马上上机，那么要在避光的条件下放置于4℃，且放置时间不能超过4小时。