在分子生物学实验里,PCR检测试剂盒属于那种绝对不能缺少的工具,它的性能跟实验结果的准确性以及可重复性直接关联着。市面上有着好多的品牌以及型号,对于初学者而言,要挑选出契合自身实验需求的试剂盒,常常会觉得特别困惑。在这篇文章当中,会从实际应用的角度出发,去分享四个核心的选择要点。
如何判断扩增效率
用于衡量PCR检测试剂盒性能的关键指标是扩增效率,在理想情形下,扩增效率应当接近100%,这所代表的含义是每个循环模板量实现翻倍,你能够借助标准曲线的斜率予以计算,其公式为(10^(-1/斜率)-1)×100%,通常对扩增效率的要求是处于90%-110%之间,要是效率偏低,那就表明试剂有可能存在抑制剂或者酶活性不足的状况,效率过高的话则有可能形成引物二聚体,在购买之前可以查看产品说明书里的验证数据,或者向供应商索要典型扩增曲线图。
灵敏度够不够用
灵敏程度决定了试剂盒能够检测到的最低模板数量,一般是以检测限来进行表示的。不同的实验场景对于灵敏度的要求存在着很大差异,比如说环境样本检测或许需要达到10拷贝/反应,然而转基因成分筛查所要求的则更低。你能够通过梯度稀释标准品去验证试剂盒的实际灵敏程度。要注意查看产品是不是提供低浓度样本的重复性数据,稳定的检出率相较于单纯追求极低检测限而言更为重要。
抗干扰能力强不强
各类常存在于实际样本里的抑制物,像腐殖酸、多糖、血红蛋白等,优秀的PCR检测试剂盒会配备专门用于应对的抗抑制缓冲液,或者借助热启动酶、优化离子浓度来增强耐受性。选择时能够留意产品是不是经过了诸如土壤、粪便或食品提取核酸这类复杂样本的验证。要是实验样本类型较为特殊,建议先去测试加标回收率,以此保证基质不会对扩增效率产生影响。
试剂盒如何正确保存
酶,引物探针,dNTPs以及缓冲液等这些组分一般是PCR检测试剂盒所包含的,大多试剂盒要求在-20℃避光保存,反复冻融的话会致使酶活性降低,建议把试剂分装成单次使用量,并且记录每次取用的时间,有些厂家推出了冻干或室温稳定的预混液,这能够大幅降低对冷链的依赖,收到试剂盒之后先检查运输温度是不是符合要求,依照说明书指引开展首次性能验证。
当你处于选购PCR检测试剂盒之时,你究竟是更加看重灵敏度所对应的数值呢,还是更加看重实际样本当中的稳定性所呈现出来的表现呢?欢迎于评论区去分享你自身的经验。






