关于生命科学基础研究里头，PCR试剂盒属于基因扩增的关键工具。针对众多品牌以及型号，怎样去挑选出稳定且特异又高效的试剂盒这个事儿，直接关联到实验数据具备的可信度，还有项目的推进进度呢。
试剂盒怎么选
起初要核查组分的完整性，预混液、热启动酶、dNTPs、Mg2+以及配套缓冲液都得完备，并且说明书清楚标明储存条件以及有效期。接着要验证适配性，是普通PCR还是实时荧光PCR呢？不同仪器的升降温速率与检测通道存在差别，在选购之前需查阅兼容性列表。
除此以外要关注样本的类型，针对于来自植物、土壤、血液又或者是组织等不一样来源的核酸，有部分试剂盒加进了具备特异性抑制剂去除功能的成分，能够起到有效减少假阴性的作用。面临预算处在有限状态时，需去对比每次反应价格以及有着可检测特性的拷贝数下限，这样一来性价比身为重要考量也就凸显出来了。
污染如何避免
气溶胶造成的污染，乃是PCR实验室一直难以根治的棘手问题。要优先挑选那种含有dUTP以及UNG酶体系的试剂盒，在进行扩增以前，将含有尿嘧啶的被污染模板予以降解，从根源之处截断残留产物再次进行扩增的可能性。操作的时候，一定得划分区域，分为试剂准备区、核酸提取区、扩增分析区，人员要朝着一个方向流动。
于每一回实验之际带上无模板对照也就是NTC，要是NTC呈现出扩增曲线的情况，那就表明存在污染现象。运用带有滤芯的吸头，将试剂盒组分依照单次使用的数量进行分装。定时使用核酸清除剂去擦拭生物安全柜以及移液器，记录各个批次试剂盒的背景Cq值，以此方便进行横向对比。
灵敏度如何提升
挑选宣称检测下限低至个位数拷贝的试剂盒，用于低丰度靶标，优化退火温度梯度，通常在以引物Tm值±5℃为范围的区间内寻找最佳温度，适当增加循环数至40 - 45个，或者延长延伸时间10 - 20秒，均可放大微弱信号。
若那块模板有着称得上高GC含量的情况又呈现二级结构状况，那么有可能要添加处于1到1.5M浓度范围的甜菜碱或者处于5%至10%比例区间的DMSO。运用热启动聚合酶并搭配专用的具备增强作用的缓冲液，能够让非特异性条带的出现数量有所减少。针对那些极其稀有少见的样本，建议先开展10到15个循环次数的预扩增操作，之后再提取产物给予第二轮巢式PCR处理。
