PCR纯化试剂盒有必要用吗

PCR反应结束之后，体系当中常常会残留数量众多的引物，以及dNTP和DNA聚合酶。要是这些杂质不被除去的话，就会对后续的酶切实验产生直接影响，还会影响测序或者克隆实验。举例来说，引物残留会跟模板进行非特异性结合，进而致使测序信号变得混乱；而dNTP会对连接反应里的ATP浓度造成干扰。运用专门的纯化试剂盒，能够迅速去除这些干扰物质，回收具有高纯度的目的片段，从而让下游实验的结果变得更加可靠。

PCR纯化试剂盒操作步骤有哪些

PCR 产物里要加入结合液，加完后得混匀，混匀之后转移至离心柱内，放着一分钟使得 DNA 跟硅胶膜充分结合，之后以每分钟 12000 转速度离心 30 秒，把收集管的废液倒掉，然后加含乙醇的洗涤液，再离心来去除盐分跟引物碎片，最后于柱膜中央加洗脱液，加完静置一分钟后离心，这样就能得到纯净的 DNA 溶液，整个流程持续时间不超过 10 分钟。

PCR纯化试剂盒回收率怎么提高

洗脱步骤是影响回收率的关键所在， 有着需要将之预热到65---70摄氏度的洗脱液， 这能够显著增强DNA从膜上解离的效率， 同时还要务必注意让洗脱液径直精确滴在柱膜正中央， 绝对不能沾到管壁，存在着对于低于200bp的小片段， 建议在结合液里面增加异丙醇的比例， 以此来避免短链DNA被冲洗去掉， 另外在最后一次离心之前要使得离心柱在室温状况状态下彻底晾干， 从而移除残留乙醇， 不然会抑制后续酶反应。

如何挑选合适的PCR纯化试剂盒

市面上的产品主要分成磁珠法、离心柱法这两类，磁珠法适宜自动化的高通量处理，然而单次成本比较高，离心柱法操作具备灵活性，适合少量样本的日常实验，购买时要着重核对试剂盒的DNA片段回收范围，常见规格是从100bp至10kb，还要留意洗涤液的成分是不是含有毒性有机物，环保型配方更适宜长期使用，有条件的情形下，可以先用标准品去测试回收率以及纯度，再决定是否进行批量采购。