PCR扩增试剂盒的核心指标有哪些

去评价一款用于PCR扩增的试剂盒，主要得看三个指标，这三个指标分别是扩增效率，灵敏度以及特异性。扩增效率对目标序列能不能被有效放大起着决定性作用，一般情况下要求处于90%至110%这个范围之间。灵敏度体现出试剂盒检测低浓度模板的能力，而特异性则用来保证只扩增目标片段，从而避免出现非特异性条带。实验室在进行选购的时候，应该优先去查看放置在产品说明书里的质控数据，特别是批间差以及稳定性测试结果。

如何根据样本类型选择试剂盒

不同样本基质针对PCR反应的抑制程度不一样，有着极大差异。血液、土壤、植物组织等常常含有酚类、多糖或者腐殖酸，这些物质能够抑制Taq酶活性。针对复杂样本，应当选择含有强效抑制物耐受组分的试剂盒，像配备特殊配方缓冲液的试剂盒，或者热启动酶试剂盒。对于纯化后的DNA样本或者cDNA样本，就可以采用标准型试剂盒，其成本更低，而且扩增速度更快。

扩增曲线异常怎么排查原因

扩增曲线呈现锯齿状形态、平台期位置过低或者起峰时间过晚，一般情况下这表明试剂盒保存的方式不正确或者反应体系配制存在错误。首先要去检查试剂是不是反复冻融已经超过了5次，若如此酶活性会显著下降。其次要确认荧光染料或者探针是不是在避光的条件下保存，因为光照会致使荧光发生淬灭。最后要再次核对模板浓度，过高的模板会对反应产生抑制，而过低的模板又有可能造成随机起峰。

怎样判断试剂盒的批次稳定性

相同一款的PCR扩增试剂盒，不同的批次中间，应当保持一致的性能。实验室能够建立内部的质控标准，采用相同的一份弱阳性模板，持续测试三个批次，对比Ct值的标准差。要是标准差小于0.5个循环，那就表明批次之间的稳定性良好。与此同时，记录不同批次的扩增曲线形态，以及终点荧光强度，这些数据能够帮助快速地识别试剂盒的质量波动。