实验室用于定量检测蛋白质、抗体或者激素等生物分子的常用工具是ELISA试剂盒，不少新手在使用它的时候常常历经结果不稳定、背景过高以及标准曲线不佳这些问题，事实上，只要把控好几个关键细节，检测数据的可靠性与重复性就能得以显著提升。

ELISA试剂盒怎么选

选 ELISA 试剂盒之际，得先弄明白检测样本的种属是啥，类型又是怎样，像血清、细胞上清或者组织匀浆这类。不同样本所存在的基质效应，会对抗体识别效率产生影响，因而务必要去确认试剂盒说明书里样本的适用范围。其次呢，要关注灵敏度以及检测范围，以此保证目标浓度处于标准曲线的中间区域。最后，得核对试剂盒里面的组分是不是齐全，预包被板、检测抗体、标准品还有显色液，这几样一个都不能少。

ELISA试剂盒操作关键点

最容易出差错的步骤是加样环节，标准品以及样本应当使用新鲜枪头，以此避免交叉污染，孵育温度连同时间要依循说明书严格操作，一般而言37摄氏度的恒温箱相较于室温更为稳定，洗涤步骤决定了背景噪声的高低，每孔洗液都得加满。静置30秒之后再拍干，重复5次以上，显色反应需留意避光，终止液加入之后要在15分钟内完成读数。

ELISA试剂盒保存条件

对于未开封的试剂盒，应当存储在二至八摄氏度的环境里，千万要忌讳冷冻，这是因为要是经历反复冻融的情况，就会对包被板的蛋白结构产生破坏的。要是已开封的标准品跟检测抗体在一次使用的时候用不完，那就需要进行分装之后，冻存于零下二十度才行，不然多次汲取取用致使降解。工作浓度的某些洗液以及稀释液，能够在短期于室温的条件下存放，不过要是超过一周的话，建议重新去进行配制。每次在使用之前，都要去观察试剂有没有沉淀或者变色的现象，一旦发现异常就要立刻停止使用。

数据异常排查步骤

要是标准曲线相关系数比0.99低的时候，则先去查看标准品稀释是否精准恰当，这里推荐使用那种拥有刻度的高精度移液器。当样本读数超过检测上限之际，应当开展梯度预实验以此来确定最佳稀释倍数。高背景常常是由于洗涤不够充分或者孵育时间过长所造成起因导致而成的情况，增加洗涤的次数或者缩短二抗孵育的时间通常往往常常往往这般常常往往往往这般常常往往这般往往常常这般往往这般往往能起到改善的作用效果。要是复孔变异系数超过15%的时候，要留意注意排除板边缘效应，能够将酶标板用封板膜覆盖之后进行温和振荡。