年后复工的第一天，我接到了老同学大刘打来的电话。在电话那头，他不停地叹气，声称最近实验数据始终处于不稳定的状态，而且团队已经毫无间断地连续加班两周时间了。
于一家生物技术公司身为研发组长的大刘，负责的是食品安全检测方面。他讲年前承接了一个新项目，此新项目需要运用ELISA试剂盒去做样品的筛查，然而所买回来的那试剂盒却是问题接连不断。
我向他询问究竟是怎么一回事。所讲的是这批试剂盒的灵敏度处于不够的状态，，标准曲线做出来呈现出线性非常差的情形 ，甚至阴性对照出现了假阳性的状况。在四月份的那个时候 ，他连续三天都沉浸在实验室之中，，更换了三个批次的试剂盒 ，然而结果都没有达到理想的程度。
听说他这般讲，我反倒记起自身往昔于实验室所遭遇的那些失误，ELISA试剂盒此物，看起来操作简便易行，然而稍有疏忽便会陷入各类圈套之中。
标准曲线线性差怎么办
大刘讲，他们碰到的首个问题便是，标准曲线弄不平。依照说明书去操作，把系列稀释后的标准品加进去后，当显色了再读板，算出的R平方值老是要比0.98低。
他们怀疑过自己加样不准，也重新校准过移液器。但问题依旧。
此后经过认真仔细地排查方知晓，乃是试剂盒储存方面出现了状况。供应商发货之际采用了普通泡沫箱搭配冰袋，送达实验室的时候冰袋业已融化了大半。试剂于运输进程当中反复经历冻融，抗体活性减损显著。
大刘这才发觉，购买ELISA试剂盒之时，单单瞅价格及灵敏度参数是不行的，供货商所具备的冷链运输能力同样是很重要的，自那天开始，他们公司内部将运输条件审核增添到了采购流程之中。
高背景噪音如何降低
高背景同样是大刘涉足过的又一陷阱，四月中旬时分，他们更换了一家供应商去展开对比测试，在显色完毕之后，空白孔的吸光度数值竟然达到了0.3，远远地超过了正常范畴。
他们依照常规的思考路径，拔高了洗板的次数指标，还拉长了封闭的时间长度，然而背景却未能降低下来。大刘引领着团队开展了一回涵盖全部流程的复盘操作。
查出问题存在于检测抗体方面，那款试剂盒所采用的是生物素标记的检测抗体，此检测抗体得配合链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶来使用，然而说明书当中的推荐稀释比例并不契合他们的样本类型。
之后，他们凭借自身力量运用棋盘滴定法再度对抗体以及酶标试剂的工作浓度实施了重新优化，如此一来，背景才得以降低。大刘发出感慨表示，ELISA试剂盒并非是毫无条件拿来便能够使用之物，特别是针对复杂样本来说，倘若不开展预实验就直接进行批量操作，那么所面临的风险是极大的。
批间差太大合不合格
四月下旬的时候，大刘他们最终成功跑通了一组看上去还不错的数据。然而新的问题出现了：新采购的试剂盒是同一品牌且同一货号，不过属于不同批次，测出来的结果差异十分显著。
在第一批次所做的标准曲线里，处于中段位置的浓度点，其OD值是1.2 ，当把这个浓度点换到第二批次时，该浓度点的OD值却变成了0.9 ，将其换算成样本浓度后，误差接近于百分之三十。
他们带着数据，去跟供货商进行沟通，供货商调出了出厂时的质控报告，声称两个批次都处于合格范围之内，然而大刘的心里是明白的，这个范围所允许的偏差，对于他们的项目来讲实在是太大了。
最後，他們行了一項決定，針對已驗證方法學的項目，一次性採購能夠完成整個研究週期的同一批次ELISA試劑盒。如此一來，雖然佔用了部分倉儲空間，卻避免了批次差異導致數據無法合併的狀況。
怎么判断试剂盒失效
据说大刘讲以前，那评判试剂盒质量优劣的时候，仅仅盯着有效期来看。然而，历经这几回的教训之后啵，如今他们已然拥有了一套涵盖于内部的验收流程。
他们会对新到的试剂盒先做一个快速验证，这个验证是用标准品做一条简化的四浓度点曲线，并且同时测一个已知浓度的质控品如果，这个质控品的回收率处在百分之八十五到百分之一百一十五之间，而且标准曲线斜率跟之前批次的历史数据偏差不超过百分之十五，这样才算通过。
这套流程，视觉上看，似乎多耗费了半天的时长，然而，却免除了后续极有可能出现的、会造成浪费的几周返工用时。
五月上旬的时候，大刘再度给我拨了一通电话。他讲项目最终进展到正式开展筛查的阶段了，首批样品的数据在重复性方面表现得相当不错。
在电话里头，他面带笑容地讲着，以往一直觉得ELISA试剂盒属于成熟的产品，闭着眼睛去购买就可以了。然而呢，到如今才明白，挑选对试剂盒，采用对方法，做好质量控制，每一个步骤都绝对不能有丝毫马虎呀。
很多从事免疫检测工作的朋友经历过和大刘类似的情况，ELISA试剂盒作为看似标准化的产品，在实际使用时存在的变数比说明书所呈现的更为多样。
从运输保存起始，直至操作细节之处，从批次验证开始，一直到样本处理阶段，任何一个环节倘若出现问题，均会对最终结果造成影响。期望大刘的这些历经波折获得的经验，能够给正在开展实验的你带来些许灵感启发。
针对于ELISA试剂盒的挑选以及运用，每一个实验室都存有自身的体会。要是你同样拥有类似的经历或者期望知晓更多的实际的操作细节，那就欢迎将这篇文章收藏起来，并且转发给身旁需要避开陷阱的友人。
