实验室里的转折点：一个朋友的ELISA试剂盒使用心得

上一周呢，跟老相识陈旭通了电话，他才从上海飞回到成都，那声音当中带着没法隐藏住的兴奋之情。

他讲，自身近来半年于项目之处取得了一次极为出色的扭亏为盈之成效，然而这所有状况的起始点，竟然仅仅是一盒体积微小的ELISA试剂盒。

我要求他讲述得更为详尽，终归处在这个业内范围里，能够将酶联免疫吸附测定做得出色的人员并非少，然而能够于困境当中寻觅到突破点的，才算是真正的能力。

他打来的这通电话，讲了差不多快两个小时，我发觉，他所拥有的经验，对于好多从事蛋白检测工作的人而言，应当是颇具价值的。

接着，便要将他所经历的事情书写出来，期望对于此刻正与 ELISA 试剂盒有所关联的你，能够产生一些具有实际意义的助力。

陈旭和他的老本行

陈旭是我大学同学，毕业后一直在成都一家生物技术公司做研发。

细胞上清以及血清样本里的细胞因子检测这活，主要是他在做，每个月起码得跑十几块ELISA板子。

照他个人的讲法，ELISA试剂盒，相当于是他维持生计的根本所在，整日整夜，不停歇地，一直围绕着如何能促使数据呈现得更为美观、怎样能令测试结果具备更高可靠性展开思索、钻研。

公司主要是为各大高校供应检测服务，还为各科研院所供应检测服务，所以，他们所拥有的实验数据必然要能够禁得起反复去进行验证。

前年的那个三月份之时，陈旭承接下了一个涉及炎症标志物进行检测的项目，其样本数量并非很少额，客户提出之要求也是颇高之状态。

第一批数据出了问题

项目起初的时候，还算得上是比较顺遂的，陈旭所采用的，乃是先前始终都在合作的某一个品牌的ELISA试剂盒，其操作流程熟悉到了能够背诵下来的程度。

等到进行到第五块板子的操作时，状况出现了。标准曲线的R平方值横竖无法提升上去且一直徘徊在0.95左右，而复孔的变异系数同样大于正常偏多。

那边客户正催促着结果，陈旭着急得嘴上都长出泡来了。他依照标准流程对孵育温度进行了排查，又对洗板次数予以排查，还对显色时间进行了排查，然而问题仍旧存在。

一周，在四月份的那个时段，他接连三天加班直至凌晨，将过去半年的实验记录全部翻看了一遍，然而依旧没有找到原因。

我向他讲，要不然去换另外一批ELISA试剂盒尝试尝试看？然后他表述公司库存存在两盒相同批次的，先去试着看一看。

偶然看到的一份参考资料

换掉使用同一品牌但是不一样批次的试剂盒之后，问题一点儿都没有得到改善，如此一来陈旭便开始去疑心试剂盒自身存在质量波动的情况了。

那时节，他于白日之内，整日整天地置身于实验室之中，而在业余的时段里，便会在网络之上寻觅资料，细细察看各类技术论坛里所展开的讨论。

五月上旬的时候，他寻觅到一份技术文档，这份文档是关于ELISA试剂盒操作要点内容的，在其中详尽讲述出测项目样本稀释液基质效应对结果的影响。

那份文档当中提到了这样一个情况，众多的实验室疏于留意一个细微之处，血清样本以及标准品稀释液的基质存在着差异，这件事能够致使标准曲线的斜率发生偏移。

陈旭这才发觉，其所使用的标准品稀释液乃是试剂盒自身所携带的，然而他自身的血清样本基质更为繁杂，并未进行基质匹配。

那个发现使得他一下子开朗了许多，马上对实验方案做出了调整，将标准品使用和样本一样的稀释液再次进行配制。

亲自验证参考资料的可操作性

参照那篇有着相关建议的文档，陈旭对一个小实验进行了重新设计，他采用了三组来源各异的血清基质，分别去稀释标准品以及样本。

得到的结果清晰可辨：针对进行了基质匹配操作的那一组而言，标准曲线所对应的R平方值稳稳当当地处于0.998以上的位置，而复孔CV值同样也降低到了5%以内。

而那些不存在匹配情况的组，数据跟先前一样差劲。陈旭开心无比，差点就要在实验室里叫嚷出来，他晓得自己寻得了问题的关键所在。

可是呢，问题并非全然得到了解决，开展新ELISA试剂盒批次的过程中，尽管曲线呈现出了良好状态，然而所测定出来的样本浓度和先前相比存在着极大的差距。

这表明除去基质效应之外，尚有别的因素处于干扰状态。他再度翻出那份参考资料，瞧见后面还阐述了试剂盒储存温度对于灵敏度的长期影响。

深入排查每个环节

陈旭作出决定要来把整个ELISA操作全部经过来都彻头彻尾详细检点梳理一回 ，他将实验室的温度记录本取出来,瞧见在此之前的一个月里那冰箱的温度存在着两次幅度较为大一些得振动波动。

那是四月中天的时候，实验室里用于存放东西的冰箱，由于对其进行除霜操作，致使温度朝着零下十度以上攀升升高，这种状态持续进行了差不多将近四个小时。

而那一批出现问题的ELISA试剂盒，恰好摆在冰箱门边的地方，温度波动是最为明显的。

他急忙去联系试剂盒厂家的技术支撑人员，而后对于抗体和酶结合物对温度敏感，以及任何反复冻融现象致使活性下落，还有温度过高造成活性下落，对方都向他给出提示。

厂家给出建议，建议他在每次使用之前，将试剂盒当中的各个组分，进行分装保存，以避免出现反复冻融的情况。陈旭依照这个建议做了，并且，还特意购买了一个小冰箱，用来单独放置试剂盒。

操作细节决定成败

六月的时候，陈旭获取到了新一批次的ELISA试剂盒，这一回他依照改进之后的流程来进行操作。

样本基质用于稀释标准品，所有试剂需提前半小时从冰箱取出进行回温，洗板之时要严格把控每孔的洗液量以及浸泡时间。

第二块板子跑完后它居然学会了运用酶标仪具备的双波长读数功能，进而降低了背景干扰，这个时候第一块板子跑完所呈现出的标准曲线R平方值为0.999，而复孔CV值是3.2%，真是让人惊讶不已！

客户于收到数据而后相当满意，讲这是他们历经半年所看过最为稳定的检测成果。陈旭随后跟我这般予以表述，他在那几日睡觉之时都因其而笑醒。

然而项目尚未结束，后续存在将近五十个样本有待检测。他务必保证每一块板子的结果均可重复。

建立自己的质控体系

首先，陈旭着手将这段时期所学到的经验予以系统化，接着，他构建出了一套针对实验室内部的 ELISA 质控流程。

每逢他运用全新的 ELISA 试剂盒之际，皆会率先开展一回预实验，以此去验证标准曲线的线性状况以及回收率情况。

对于每一个样本，他始终坚持去做两个复孔，而且每一块板子都要带上三个具备不同浓度的质控品，以此来监测板间差异。

他把这些操作方面的细节，写成了标准作业程，序分享给公司里的其他同事，七月中旬他曾负责那个项目，顺利搞成了结题。

令他愈发开心的是，往后的几个月当中，他所跑的二十多块板子，均未曾再度呈现出过大的波动情况。

在国庆节来临之前，公司进行了一批新的ELISA试剂盒的采购行动，陈旭也参与其中，涉及到供应商评估环节，并且依据他自身所拥有的经验，提出了几条关于选择方面的标准。

从困境中总结三个关键点

我向陈旭发问，要是让他给才开始接触ELISA的人给出一点建议，那他最想要说的会是什么，他思索了一番，归纳出了三条。

当拿到随便哪一款ELISA试剂盒之时，预先务必看明白说明书当中记录着的样本类型，还有与之对应的稀释液建议，千万不要遗漏掉基质匹配这一要点，记住了吗，这可是非常重要的呀！

试剂盒储存以及使用的各项细节实在是极为重要，温度这一方面，分装的情况，还有回温的状况，这些看起来并不起眼的要点常常就是问题产生的根源所在。

必须要有属于自身的质控体系，标准曲线以及质控品乃是最为好用的监控工具，切莫嫌麻烦。

他讲，这些事物，在诸多技术文档之中均有记述，不过，当自身未曾遭遇吃亏状况之际，压根不会将其置于心上。

当下，他每跑一块板子，心里都会将这些要点逐一过一遍，此情形已然形成了肌肉记忆。

后来怎么样了

今年三月期间，陈旭身处的公司承接了一个全新项目，此项目的必需任务是对一批着实珍贵的样本里的多个指标展开检测。

样本数量极为稀少，每一项指标仅能够开展一回检测，不存在再次进行的可能性，公司的领导专门指定陈旭来承担责任。

他运用自己归纳总结得出的那一套方法，挑选了口碑一直稳定的ELISA试剂盒，预先把充分的预实验给做好了。

成果极其理想，各项指标所关联的数据均坐落于预期范畴之内，客户径直签署了后续为期一年的合作协议。

上个月份所在公司于内部展开评优活动，陈旭凭借自身表现拿到一个被名为技术创新奖的奖项，该奖项附带的奖金数额为两万块，之后他相邀我们几个往昔的老同学共同参与了一顿火锅的饮食活动。

在饭桌上，他讲了这样一番话，倘若不是去年那段日子，被ELISA试剂盒搞得疲惫不堪，他估计直到眼前，依旧会不断重复那些非常低级的错误。

有的时候，那种处于困境的状况，真的堪称是尤为出色且绝佳的老师，重点在于，你是不是能够让自己的心安静下来 ，由此找寻且找出问题的根源所在。

给同行的一点参考

陈元的阅历事实上蛮具代表性的，好多从事蛋白检验的人都将会碰到相仿的状况。

ELISA试剂盒自身质量存在着等次不一的状况，然而更多情形下，问题是出在了使用阶段的操作以及细节把控方面。

倘若你当下也正遭受着标准曲线欠佳、重复性不佳或者回收率偏下的困扰情况或许首先可以从下面几处进行排查。

查验一下，你的样本基质与标准品稀释液是不是吻合，确认试剂盒在所涉及的储存这块以及分装方面有无差错。

试探一下洗板机是不是得进行校准，又兴许洗板手法是不是得去做些调整；最终可千万不能够忘掉质控品存在着的重要性。

这种些要点讲起来容易，然而每一项都值得你耗费时间仔细检验。期望陈旭的事迹能给你些许启迪。