上个月开组会，我看到老张时，差点没能认出来。他是一家分子检测公司的研发骨干，平常总是一副精神饱满的模样，然而那天，他却顶着一双黑眼圈，眉头紧紧皱着，会议室里烟雾弥漫，都无法掩盖他脸上的疲惫神情。会后一起抽烟时，他才向我倾诉苦衷：“兄弟，这次恐怕搞不下去了。”。
老张所在的公司规模不算大，专门针对一些高校实验室、以及第三方检测实验机构，来供给分子检测的耗材，同时提供技术方面的支撑。去年接近年终时，深圳地区的分公司承接了一起大的订单，是为南方的一个大型水产养殖基地，去研发一套现场快速病原检测的方案。假若这单子能够成功，不但利润会十分可观，更是作为开辟新市场的具有代表性的项目。合同已经签署，预付款业已收取，客户提出的要求非常清晰：从进行采样一直到得出结果，整个操作流程一定要在两小时之内完成，而且准确率也必须要有保证。核心当中的难点，恰恰就卡在DNA扩增这个环节之上。
传统的PCR扩增，动不动就要一两个小时之久，再加上前处理以及后分析环节，两小时内出具报告简直就如同天方夜谭一般。最开始的时候，团队将全部希望都寄托在了优化反应体系这件事上，调整镁离子的浓度，更换使用不同厂家的聚合酶，一遍又一遍地去做梯度实验。在那段日子里，他差不多带着团队吃住都在实验室，夜晚就睡在隔壁会议室摆放的行军床上。然而所取得的进展非常微小，速度最快的那一次也要85分钟才能够完成扩增，距离目标存在着不小的差距。
快速PCR扩增试剂盒能否节省大量时间？
明明距目标已近在跟前，然而结果却毫无进展，这般无力之感致使整个团队士气低落。老张讲，在三月份的某个夜晚，深圳正下着小雨，他独自一人于空荡荡的实验室里望着跑胶结果发呆，心里思索了诸多。是直接去采购市面上的快速PCR试剂吗？可是现有的产品，要么价钱高昂，单次检测成本剧增客户必定不会接受；要么便是宣称的时间存在水分，实际使用时稳定性欠佳，重复性不佳。他于技术论坛以及行业社群之中也询问了一番，同行们所发布的帖子多数是针对遇上同样问题的抱怨，而真正切实有效的解决方案资料极为稀少。日子一天天地流逝，压力愈发增大。在客户每周一次的进度沟通会上那再三的追问，使他更是感觉如坐针毡，极为难受。
几乎就要跟老板建议“壮士断腕”放弃那个项目之际，一次偶然的机会冒出来了，四月初的时候，我们前往上海参加一场行业展会，就在展会快要结束之时，我于一个不太显眼的展台前看到有厂商在演示一款新品，他的展板之上写着快速PCR扩增试剂盒，是为现场快速检测等场景专门打造，具备加热速度快，减少循环时间等优势，我当时心里猛地一动，马上给还正在实验室煎熬着的老张发送了一条信息，附上了展台的地址以及联系人的名片。
实际上，我有很长一段时间未曾深入探究过这类产品，因而对于市面上这些快速PCR扩增试剂盒的特性不太明晰，不过下意识里觉得这或许对他而言是个契机。依据我的查阅情况来看，这类试剂盒的关键之处在于其预混的反应体系运用了经过特别改造的热稳定性聚合酶，再配合优化后的缓冲液配方，能够在确保扩增效率以及特异性的条件下，明显提高升降温的速度，进而把整个扩增进程缩短至30分钟左右，甚至更短一些。如那种老的 ，样品处理所需时间不那么长 ，人员操作起来较为便捷 ，能节省下数量可观的时间之类的话语 ，或许都属于其在宣传时所提及的平常优势。
哪里可以采购到可靠的快速PCR扩增试剂盒？
有个叫老张的家伙，对我随手予以提供的这条线索相当重视，他全然不顾周末正当时，马上就联系了那家厂商，还去索要样品以及详细的技术参数文档。然而他并未贸然直接去使用，这乃是他多年从事研发过程中慢慢养成的严谨习惯。“兄弟，并非是我不相信你所介绍的那些东西，”后来他跟我讲道，“毕竟这是关键项目，倘若试剂盒出现问题，那我们之前付出的所有努力可就全都付诸东流了。我必须得先为它把把关才行。”。
他促使对方率先安排送去了几份小样过来，收到之后，他亲自着手设计验证方案，并未马上将其应用于他们的水产病原靶标之上，而是首先采用标准的人类基因片段以及几个常见的微生物质控品去进行测试，他声称那几日，半个实验室的资源都为他调配用以开展这个平行对照实验。在同一台机器上，运用他们原先自行配置的体系，使用进口的某品牌通用试剂盒，接着使用这个新的快速PCR扩增试剂盒，运行同样的循环数，对比Ct值、扩增曲线、熔解曲线以及最终的电泳条带。结果迅速呈现出来：新试剂盒的扩增时长稳定处于28至32分钟的范围，相较于他们的自配体系快了将近一小时；其扩增效率、特异性均与进口标杆产品不相上下，甚至在某些高GC含量的模板上展现出更为稳定的表现。
结果使老张心里有了底，他经由行业协会的朋友侧面去打听那家厂商的口碑，确认并非是那种仅有“PPT产品”的空壳公司。上周，他带着一份详细的评估报告，以及初步的合作方案，飞去了无锡，直接去参观那家试剂盒生产商处于惠山区的匹配精密仪器产品众多的生产车间。他亲眼查看了他们的原料质检，还有生产分装以及环境控制，心里最后的石头才落了地。
如何验证快速PCR扩增试剂盒的扩增效果？
回来之后，团队马上进行转向，他们手中的核心任务在于，将那“外源性”的快速PCR扩增试剂盒，同他们针对水产病原（像是对虾白斑综合征病毒）所设计好的特异性引物探针，以及经过简化的样本快速裂解提取步骤，毫无缝隙地整合为一个完整的“样品输入，结果得到”的简易傻瓜流程。在验证阶段，他们特地从合作的养殖场采集了不同感染程度的真实病料样本，并且模拟了当场切实能被发现存在的各类干扰物。
此项工作内里的难点之处在于集成以及优化，单单只是样本裂解液残留针对快速PCR反应所产生的抑制这个问题，他们前前后后调整了七八回净化步骤，接着逐个去做验证，当然，在整个过程当中那个快速PCR扩增试剂盒的表现向来很“抗造”，扩增的时间稳定，结果的重复性良好，给了他们充足的试错以及优化基础，老张讲，那段日子，尽管加班仍旧很频繁，不过大家眼睛里面有光亮了，每天都能够看见显著的存心花销时间，因为晓得方向是正确的。
他们成功构建起一个完备的现场检测流程，其中含样品处理需时15分钟 ，DNA进行快速释放与充分纯化用时15分钟 ，后续时间则属快速PCR扩增试剂盒发挥作用的时段。整个流程自接收样本起始直至获取可靠的荧光定量PCR结果 ，总时长成功被控制在110分钟以内 ，全然达到了客户合同所规定的要求。上个月底 ，他们携带着整套设备 ，前去那个水产养殖基地的塘口旁边进行实际演示，结果获得了客户技术总监的高度认可。
上周 ，我跟老张一块吃饭 ，他整个人的状态已然全然不同了 ，变得松弛了好多。聚餐结束之后 ，这位客户还追加购买了后续一年的试剂耗材供应合同。对他来讲 ，攻克这个项目的意义 ，远远不只是完成一笔订单那般简单。他自己总结 ，这次经历使他深切认识到 ，在技术迭代极为迅速的如今 ，一个成熟的研发人员或者团队 ，核心竞争力不一定是掌握全部底层技术从零到一的创新 ，而是在于怎样高效地识别 、筛选 ，并且可靠地整合外部已有的优秀技术模块 ，用以解决自身面临的特定应用问题。或者可以这么讲，那其实就是具备了一种能够“为我所用”的能力。有的时候，相比较于独自创造，对于现有的方案去进行优化，甚至是要比发明更具意义的。
我向他发问，那个运用了众人成绩的快速PCR扩增试剂盒，后续情形如何呢？他面带笑容说道，其已然成为他们公司面向“快速现场核酸检测”这类定制化开发项目的标准配置当中的一项，而且正与厂商就依据他们具体应用场景的进一步定制化合作展开探讨。“诸多事宜，改换一种思路，说不定就一下子领悟明白了。”。最初，我们的目光仅仅聚焦于自身实验室那有限范围的优化，沉迷其中，不如跳脱出来去审视整个行业，近来产品更新换代的速度实在太快了，借助可靠的外部助力，或许才是最为高效的途径。
