你最近是不是也觉得PCR扩增太慢了？

上星期三的下午时分, 我于实验室待了一整个下午, 眼睛直盯着那台PCR仪, 内心着急得好似热锅之上的蚂蚁。客户催促着要结果, 老板在微信里追问进展情况, 然而我的扩增程序仍旧滞留在第二阶段的循环之中, 时间一秒一秒地消逝, 样品却始终没有给出结果。

我有个朋友, 他叫老周, 于一家从事生物相关业务的公司担任研发主管一职, 其手下带领着五六名人员。他这个人在处理事情方面向来表现得利落干脆, 然而却偏偏遭受PCR扩增效率这一问题的困扰长达大半年时间。每一次召开组会的时候, 老板都会出声询问说: “老周, 你们组所负责的项目周期可不可以再度进行压缩? 客户已经等得不耐烦了。”。

老周露出苦笑, 他心里比任何人都明白, PCR扩增存在的瓶颈之处在于那套传统的试剂盒。进行一次完整流程, 至少需要一个半小时, 倘若遇到复杂模板的时候或者引物设计并非特别理想情况下, 两三个小时都是很正常的状态。更让人感到烦躁抓狂的是, 有时候完成操作后查看电泳图, 条带要么呈现模糊的状况, 要么径直就没有出现相应条带, 如此一来又不得不重新做上一遍。那段时期。老周的脸几乎就要变成苦瓜的模样了。

快速PCR扩增试剂盒真的快吗

老周向我倾诉不满时, 我不经意间讲了一句: “你有没有尝试过快速扩增试剂盒呀? ”。

他当时愣了一下, 随后说道, 他用过, 在这之前购买过几个不同品牌的, 那些品牌声称半小时就能搞定, 然而实际情况呢, 要么是扩增效率很低, 要么是非特异性条带多得简直吓人, 稳定性实在太差劲了, 根本就没办法用来干事儿。

实际上, 我对老周所遭受的情况是极其能够理解的。在市面上, 的确存在着一些被称为“快速”的产品, 然而, 其中有好多仅仅是在温度循环程序方面进行了简化处理, 并没能从根源上把酶的活性问题给解决掉。快速扩增本身对于酶所提出的要求是极为高的, 其既要能够耐受高温, 又要有很高的延伸速度, 同时还得具备良好的错配率控制能力。要是没办法达成这三点之间的平衡, 那么所说的“快速”就纯粹只是一句空话而已。

老周起初也进到过这类陷阱, 耗费了诸多本不该花的钱, 尝试了好些不同的牌子, 然而最终的情形都未达预期。他曾有一段时期对“快速PCR扩增试剂盒”这个物品类别萌生了质疑, 认为这大概仅仅是一种营销的虚头。

快速PCR扩增试剂盒哪个牌子好

但今年三月份，事情出现了转机。

那天, 老周前往参加一个行业交流会, 在交流会中, 坐在他身旁的一位同行谈起了自身的项目进度, 这位同行说道, 他们公司近期更换了一款全新的快速PCR扩增试剂盒, 该试剂盒能够在四十分钟至六十分钟的时间范围内完成扩增, 并且所呈现的条带清晰, 其重复性尤为出色, 老周一听闻此言, 眼睛瞬间亮了起来。

他当场就问：“哪个牌子的？”

老周听同行提到他们近期正在使用的一款产品, 记住了那个产品的名字, 回来后就去寻找渠道拿了一批样品。他因为之前有过被坑的经历很害怕, 所以此次格外谨慎, 先拿自己手上难度极大, 是呈现有一个GC含量高达百分之六十五的基因片段的模板做了测试。

结果出乎他的意料。

在三月中旬推进了第一批测试, 老周亲自对机器予以密切关注督查, 历经四十多分钟，扩增宣告结束, 他提取产物进行电泳操作, 当目睹结果之际, 不禁发出“嚯”的一声, 条带呈现出又亮且锐利的状态, 几乎不存在背景杂带, 纵使是一直扩增未成功的高GC区域也顺利出现条带, 他即刻将结果拍摄照片发送给老板, 老板回复了一个大拇指！

快速PCR扩增试剂盒能省多少时间

老周后来越用越顺，他算了一笔账。

过去使用传统试剂盒时, 一个完整的扩增流程, 还要加上准备时间、跑胶时间, 一个样品起码需要三至四个小时。要是碰到需要对退火温度进行优化的情况, 就得重复操作三四回, 一天下来最多也就能够做两组实验。

眼下更换了该款快速PCR扩增试剂盒, 其一整套流程被压缩至六十到七十分钟。若仅是进行简单扩增, 即便四十分钟便能够完成。一日之内, 他可轻便操控四到五组实验, 效率提升幅度已然超过一倍。更为关键之处在于, 他无须频繁进行重复实验, 原因在于一次成功率自先前的百分之六七十提升至百分之九十以上。

那时候的老周, 整个人发生了改变, 开会之际, 脸上浮现出了笑容, 老板也不再对他进行催促, 他甚至拥有了精力, 去思索一些以往没有时间去做的优化实验。

当然, 这款试剂盒并非毫无瑕疵。老周讲, 它对于模板质量的要求相较于传统试剂盒略高些, 要是模板降解程度严重, 又或者纯度不足, 扩增效率依旧会受到影响。然而, 这乃是所有快速扩增产品所共有的特性, 并非它特有的问题。只要平常提取核酸之际留意操作规范, 大抵不会出现问题。

快速PCR扩增试剂盒适合哪些实验

当我把老周所拥有的经验分享给在身边进行实验的朋友之际, 好多人都在询问同一个问题, 那便是: 它适合去做怎样的实验呢?

老周自己的体会是，这款试剂盒在以下几种场景下表现尤其出色：

首先, 第一个场景是常规基因克隆以及鉴定, 就像你从菌落里挑取单克隆去做PCR验证似的, 在前过去的时候可能得等来一个半小时才能够看着结果, 然而当前才四十分钟就把那个结果确定出来了, 对于大量样品筛选这项工作而言, 所节省下来的这样一个时间段是极其可观的。

第二个场景为基因分型以及突变检测, 因其扩增特异性良好, 非特异性条带数量少, 故而在进行SNP检测或者点突变验证之际, 结果极为清晰, 无需反复跑胶予以确认。

第三个场景为快速病原体检测, 老周有位同事在做环境微生物监测, 其要快速判定样品里是否含有特定病原菌, 使用这款试剂盒后, 整个检测流程从原本的四个小时被压缩至两个小时以内, 极大提高了出报告的速度。

即便如此老周依旧提示, 要是开展高保真克隆之实验, 或者进行长片段扩增的一类实验, 还得依据具体所需挑选适宜的酶。再说快速试剂盒于片段长度这块儿, 以及保真度方面, 跟传统的保真型酶存在一定的差距呢。

快速PCR扩增试剂盒的稳定性怎么样

在用了大概两个月之后, 老周, 我也, 对这款试剂的稳定性产生, 了好奇。毕竟, 他原先踩过不少坑, 这次能够坚持使用下来, 这, 就表明稳定性必定是过关的。

四月底之际, 我去往老周的实验室找他谈事, 彼时恰巧瞧见他在开展批量验证, 他一日之内作出六十个样品, 所用皆为同一批次的快速PCR扩增试剂盒, 我目睹他完成电泳, 六十个孔位的条带齐齐整整, 亮度相同, 背景洁净, 他称这是他连续测试的第五批样品了, 每次的结果皆高度重复。

老周讲, 这款试剂盒稳定性佳, 关键在于其聚合酶, 酶活性颇高, 即便处于快速循环状况下, 也能够维持稳定的延伸速度, 况且对于抑制剂的耐受性也较为良好, 并且配方之中添加了一些特殊的缓冲组分, 能够更优地维系酶在高温时的构象稳定性, 这些细节普通用户虽无法瞧见, 但却直接限定了实验结果的可靠程度。

他如今已然全然将实验室的常规扩增替换成了这款快速PCR扩增试剂盒, 采购部那边也进行了统计, 单就试剂成本而言, 实际上与传统试剂盒相近, 然而由于减少了重复实验的次数, 总体实验成本反倒降低了百分之二十左右。

倘若你跟老周先前那般, 遭受PCR扩增效率低下这一问题的困扰, 不妨去尝试换一款切实好用的快速PCR扩增试剂盒。有时, 一个细微层面的工具升级, 便能够使整条实验线的节奏加快。