上个月, 老张坐在实验室的凳椅之上, 凝视那计算机屏幕之上不停跳动的数据曲线, 他的眉头拧成了如同麻花股状的样子。他乃是我们这个圈子里颇有名气的“实验狂人”, 于一家从事生物科技的公司里负责新药研发的前期筛选相关工作。自三月最初时起, 他手里所负责的方案进入了最为关键的阶段, 需要不断反复去验证一批候选化合物针对靶点酶活性的抑制真实效果。他曾经跟我倾诉过, 最为令人犯愁头疼的并非是化合物本身这个东西, 而是进行检测的这个环节——数据出现波动的幅度较大, 具备的重复性比较差, 最终结果呈现出来之时连他自己都不敢相信这是真的。
快要认识老张十年了, 起始于大学时期, 他就具备凡事都要较个真的性格。他耗费八年时间待在实验室里, 对于各类检测的方法十分清楚, 然而这次竟然遭遇挫折。他选用传统荧光法检测试剂盒, 原本觉得驾轻就熟, 谁知后续实验结果连续三周都如同过山车般起伏不定——上午所测的 IC50 为 50 纳摩尔, 下午更换一批试剂再次测量时就变为 120 纳摩尔。老张挠着头顶说: “要是把这结果拿给老板看, 肯定会被骂得千疮百孔。”。
一直到四月中旬的时候, 有个在同行公司上班的朋友, 给他提了个醒, 说: “你去试试酶活性比色法检测试剂盒, 我们这边才刚换的, 它的稳定性把荧光法甩出去好几条街呢。”老张心里将信将疑, 毕竟比色法听起来貌似有点“老派”, 当下大家不都是在追求高灵敏的荧光和发光法吗? 不过他实在是被波动的数据折磨得够惨的, 于是决定死马当活马医。
他先是从供应商那儿要了一份样品, 拿到手予以细看说明书。酶活性比色法检测试剂盒的原理实际上并不复杂, 底物于酶的作用之下生成有色产物, 颜色深浅跟酶活性成正比例, 借助酶标仪在特定波长读取吸光度即可。老张讲, 他最为担心的是比色法灵敏度不足不够, 毕竟他的样品浓度跨度大, 从纳摩尔直至微摩尔均有。但真正着手之后, 他发觉情况全然不一样。
进行首次正式实验时, 他挑选了来自同一批次的试剂盒, 使用自身配制的标准品展开了八次重复操作。结果呈现出来后, CV值（也就是变异系数）竟然仅仅只有3.2%。当时老张在微信上面给我发送了一长串的感叹号, 声称他投身这一行业这么多个年头, 首次见识到比色法能够将重复性达成这般程度。他随后讲道，这是源于酶活性比色法检测试剂盒的底物具备良好稳定性, 不会如同荧光底物那般易于出现光漂白的情况, 并且也不会受到pH以及温度微小波动的影响。
四月底的时候, 老张所负责的项目迎来了最为紧张的那个节点, 这个节点就是老板要求他在五一假期到来之前提交一份完整的数据报告。当时时间紧迫, 任务繁重, 他需要在三天的时间内完成两百多个样品的检测工作。要是采用原来的荧光法, 那么单次实验就得花费四个小时的时间, 并且还需要频繁地校准仪器, 这样根本就来不及完成任务。然而酶活性比色法检测试剂盒的检测流程简单到让他感到意外, 其流程为加样、然后孵育, 最后读板, 仅仅三步就能够搞定, 一个96孔板从开始一直到得出数据所花费的时间不到九十分钟。
鏖战两昼夜以迄, 老张按时呈上报告。数据之佳, 令其自身亦稍感恍惚, 阳性对照之抑制率恒定于百分之九十五至百分之九十八间, 阴性对照之基线漂移几可忽之不计。老板阅毕报告, 破天荒嘉许之, 且询其何以得此成效。老张憨笑, 未多言, 然其后私下告我: “此酶活性比色法检测试剂盒实乃为我省却诸多心力, 数据稳则底气足。”。
酶活性比色法检测试剂盒到底准不准？
众多人一听“比色法”这三个字, 其第一反应便是“老古董”。老张先前亦是这般认为, 觉得比色法灵敏度欠缺、抗干扰能力欠佳, 比不上荧光法以及化学发光法那般“高大上”。然而此次亲身经历使之彻底改变看法。他向我解释称, 当下的酶活性比色法检测试剂盒历经了好几轮技术迭代 , 底物选择更为讲究 , 缓冲体系也更为稳定 , 诸多厂家甚至添加了抗氧化剂与螯合剂来排除金属离子干扰。
举自己所用品牌为例的老张, 在不同温度, 也就是22°C、25°C、37°C的不同条件下, 又在不同pH, 即7.0、7.5、8.0的不同情形下, 做了交叉验证, 结果表明吸光度的变化幅度不超过5%。这表明即便实验条件存在轻微波动, 数据依旧可靠。他专门查阅了文献, 发觉诸多发表于SCI一区期刊上的酶动力学研究, 运用的正是这种方法。他深有感触地说: “准不准, 并非是查看方法的新旧, 而是看数据跟真实情况能否对得上。”。
酶活性比色法检测试剂盒怎么选，关键看这几点
经受过荧光法之坑的老张, 在选择试剂盒这件事情上变得格外审慎。他自行归纳出了一套筛选标准, 我在对其进行整理之后, 将之分享给或许会遭遇相同困境的你。
查看底物的特异性, 部分比色法试剂盒中的底物, 会遭受还原性如DTT、谷胱甘肽这类物质的干扰, 进而致使出现假阳性的情况。老张在进行试用之前, 特地实施了干扰测试, 将常用的还原剂添加到反应体系当中, 结果他所选的这个品牌并未受到显著的影响。
观看检测的窗口期, 比色法的线性范围相当关键, 要是这个范围太过狭窄的话, 那些高浓度的样品很容易就会达到饱和状态, 而对于低浓度的样本却又没办法检测出来, 老张所使用的那个试剂盒, 其线性范围涵盖了从0.1到100毫单位的酶活性, 大体上能够覆盖他所面临的所有场景。
留意批间一致性情况。他一次性购入三个批次的试剂盒, 于同一条件下开展标准曲线对比工作, 三个批次的斜率差异未达8%。他对我讲, 批间稳定乃是进行QC以及长期追踪实验的生命线, 稍有差池便会导致前功尽弃。
酶活性比色法检测试剂盒会不会被其他方法淘汰？
五月中旬的时候, 老张前往参加了一场行业交流会, 在交流会的席间, 老张跟几个同行交流讨论到了检测方法的选择问题。当时, 有人提及, 当下微流控以及电化学检测技术十分热门, 那作为一种检测方法的比色法, 会不会逐渐被边缘化呢? 老张听到这话当场便笑了, 他表示: “技术的确是在不断更新的, 然而比色法所拥有的核心优势, 也就是简单、稳定以及成本低, 是其他方法在短期内无法进行替代的。”。
他列举了一个事例, 其所在的公司于去年购置了最为新型的电化学检测设备, 该设备的灵敏度确实堪称颇高, 然而日常维护所需的成本以及耗材所产生的费用却增长了数倍之多, 并且其操作极为繁杂, 培训一位新手能够上手操作至少需要长达一个月的时间。而酶活性比色法检测试剂盒, 实习生经过半天的培训便能够独立进行操作。老张进行了一番成本核算: 采用荧光法, 单个检测孔的成本大约处于八块钱左右；采用比色法, 单个检测孔的成本低于两块五毛钱。对于中小型的研发团队而言, 哪种方法性价比更高显而易见。
在交流会结束以后, 老张便跟好几个同行相互留下了联系方式。其中有一个从事抗体药方面工作的朋友, 在回去之后, 也更换了酶活性比色法检测试剂盒 , 在试用了一个星期以后, 给他发送消息讲: “以往采用荧光法的时候, 老是会被细胞裂解液当中的自发荧光所干扰 , 在换成比色法以后, 数据变得干净多了 , 终于不用在半夜起床重新做实验了。”。
老张的酶活性比色法检测试剂盒使用心得
昨天, 我前往老张的实验室, 目的是去找他一块儿喝茶, 当时他桌上正摊着刚刚做完的一批结果, 他伸手拿起一个试剂盒的包装盒, 而后指着上面所标注的参数, 对着我说道, 你瞧, 这个试剂的保存条件明确写着是4°C避光处, 有效期为十二个月, 那我去年购买的那个批次, 直至如今仍在使用, 并且数据稳定性丝毫没有发生改变。
他特意着重提及操作方面的具体细节, 比色法尽管较为简易, 然而在进行加样操作之际务必留意规避产生气泡, 这是由于气泡易于引发光散射现象出现, 进而对吸光度读数造成影响。他向新手提出建议, 使用多道移液器通过分批的方式来加样, 尽力维持每一个孔的反应时间保持一致。除此之外, 他存有这样的习惯, 即在每次开展实验之前运用新鲜配制而成的标准品去制作出一条标准曲线, 以此确保所有的数据存在依据可供遵照。“切勿偷懒, 标准曲线乃是校准流程中的关键所在, 省去这一步骤, 数据便决然毫无价值可言。”他轻抿了一口茶, 神情极为认真地这般说道。
老张最初被荧光法弄得焦头烂额, 后来对酶活性比色法检测试剂盒信心十足, 这期间他只用了不到两个月时间。他跟我讲, 做实验如同开车, 路况良好时任何车都能行驶顺畅, 可是碰到坑洼不平的烂路, 就能看出底盘是否稳固了。如今的酶活性比色法检测试剂盒, 底盘坚实, 操作简便, 数据稳定, 对研发人员而言是最为靠谱的搭档。
要是你同样正为检验数据不停波动幅度大、反复出现规律性差而感到苦痛烦恼, 那不妨去尝试一下老张曾经走过的这条道路。有时, 转变一种思考的方向思路比一味固执地钻研新的方法手段更具实际效果作用。毕竟, 所开展的实验做得到底好不好呢, 并非取决于你动用了多么昂贵价值高的技术, 而是要看数据可不可以经受得住严格细致的查问考验。
