朋友老张的“翻车”经历
上个月，老张差点把他的实验记录本摔在地上。
我认识长达五年之久作为朋友名为老张之人, 于一家生物性质公司的研发部门担任项目主管之职位, 其主要所从事工作任务乃是进行蛋白标志物的检测以及筛选相关事宜。他在做事方面向来具备稳当的特性, 但最近达半年的时间段里, 他手下所产生的实验数据始终呈现出不正常的状态, 即针对同一个样品而言, 三次进行实验跑出来的OD值竟然能够相差出将近20%的幅度。
他于电话中跟我吐槽, 说这东西要是拿去给客户瞧, 人家必定会骂他造假, 其语气里有着一种既无奈又焦躁的疲惫。我那时没多作思考, 仅仅是当作实验操作出现了差错, 一直到上周末他邀约我出去就餐, 才将整件事情的前因后果讲述明白。
有那么一顿饭的时间, 我自始至终都在听, 结果发现他所遭遇的那些问题, 几乎是每一个从事科研ELISA试剂盒工作的人都会碰到的情况。之后我把他的那段经历认认真真地写了下来, 满心期望能够让读到这篇文章的你, 在相关路途方面能够少经历一些曲折。
为什么科研ELISA试剂盒的数据总是不稳定？
最开始被老张怀疑的是操作手法, 他让团队之中的两个技术员各自复测同一批样本, 严格依据说明书去做, 然而两个人的数据依旧对不上, 一个偏高, 一个偏低, 彼此谁都不服谁。
老张表示, 当时自己就处于一种懵掉的状态, 自己进行了长达八年时间的实验, 在这第一回的时候, 竟感觉自己没办法去做ELISA了。
之后他才发觉, 问题的关键并非在于操作, 而是存在于试剂盒自身。他先前一直所使用的是某一家小型工厂生产的试剂盒, 其价格的确较为便宜, 然而不一样批次之间的稳定性乃是特别差的。同一货号在不同批次的试剂盒当中, 抗体效价能够相差出一倍之多。
这实际上是一种颇为隐秘的陷阱, 众多从事科研工作的人, 特别是那些预算并不宽裕的研究生以及初创团队, 常常会受到低价的吸引, 然而科研 ELISA 试剂盒的关键并非在于价格低廉, 而是在于重复性以及一致性, 要是你的数据无法重复, 那么后续的发表文章、申报项目以及进行转化, 均会被直接一票否决。
怎么判断科研ELISA试剂盒的质量好不好？
两个星期之后, 老张把市面上主流的那几个品牌都买回来, 进行对比测试。他总结出来了三个判断标准, 我认为特别实用。
核查批间差, 品质优良的试剂盒会于说明书之中明确标注批间差的CV数值, 该数值通常条件下需小于百分之十, 要是说明书仅仅阐述批内差, 对于批间差未有提及, 那就需要谨慎留意了。
查阅回收率情况, 选取已知确定浓度的标准品, 借助试剂盒予以测量, 观察实际测量所得数值与理论数值之间的差别, 真正具备可靠性的试剂盒是何种状况, 回收率理应处于90%至110%的范围区间呐 , 老张所检测的那一批来自小厂生产的货品, 其回收率仅仅只有70%多一点。
审视线性范围, 存在这样的情况, 部分试剂盒所标称的检测范围极为宽泛, 然而在实际操作中, 于低浓度区域信号呈现出极其微弱的态势, 并且背景噪声却又处在较高水平, 以至于根本无法得以使用。老张给出建议, 优先去开展一次进行梯度稀释的预实验, 以此来查看标准曲线是否呈现为平滑的S形。
这话是老张说的, 当时他正用筷子夹着菜, 表情终于没那么拧巴了, 他说自己后来换了一个有资质的大厂供货, 别的暂且不说, 至少每次下单时那种稳定感能让自己心里踏实。
实验失败后的补救方法，这几个步骤很关键
老张将第一批问题数据全都给废弃掉了, 那可是他耗费一个月所收获的劳动战果, 居然说扔就直接扔掉了, 致使团队的士气在那段时间一度变得很低落。
他没有马上重新去采购试剂盒, 而是先做了一件事, 这件事就是复盘。他把往日所有的实验记录都翻找出来, 一项一项去排查, 排查这孵育温度是不是恒定的? 看这洗板次数是不是一致的? 查这显色时间是不是精确的? 最终发现, 有一个技术员习惯在室温状态下孵育, 而另一个技术员习惯借助 37 度的恒温箱进行孵育, 这两个条件之间存在的差异足夠致使结果产生系统性的偏差。
老张说, 好多时候, 试剂盒自身不存在问题, 是人的操作习惯将问题给放大了。
他对标准操作流程进行了重新制定, 把每一步状况下的条件予以固化, 乃是采用相同的孵育温度, 运用同样的洗板机以及同样的读板时间。随后, 他针对新买的科研 ELISA 试剂盒再度开展了一次预实验, 在这一回, 数据所呈现出的稳定性显著得以好转, CV 值降低至 5%以内。
所以, 要是你此刻也碰到了数据不稳定的状况, 别着急去责骂试剂盒。先去仔细排查自身的操作流程, 接着再对比试剂盒的质量。这两步都落到实处了，问题基本上就能够得以解决。
小实验室怎么选科研ELISA试剂盒才不踩坑？
老张所在团队规模不算大, 预算也并不宽裕, 他在采购新试剂盒之际, 遭遇了一个颇为现实的难题, 大品牌产品质量优良, 不过价格高昂, 小实验室无力购买, 小品牌价格低廉, 然则质量缺乏保障。
他最后是怎么破局的呢？
他寻得了一家于行业之中具备一定口碑然而并非处于一线阵势的品牌, 率先索要了一批试用装, 对方极为爽快地予以了, 并且还额外附带了完整的COA（分析证书）, 老张凭借这批试用装开展了三次独立重复的实验, 在确认数据处于稳定状态之后, 方才下定决心进行批量采购。
绝不能够因贪图便宜而行动, 也不可以盲目地去追求大牌。最为契合小实验室情形的那种办法其实是: 先展开试用这种行为, 之后再讨论价格的相关事宜。老张做出了如此的总结。
对此他给出建议, 采购之际务必要问明白售后支持的相关情况。优秀良好的供应商会给予技术方面的支撑, 甚至于能够协助你去优化实验方案。而那些售卖完成之后便不再理会你的供应商, 即便其价格极为便宜, 也千万不要去接触。
科研ELISA试剂盒的保存和有效期，很多人都搞错了
在这之前, 老张对于这样一个问题从未将其放置于心上, 他养就的习惯是把试剂盒径直朝着4度的冰箱里面一塞, 等到需要使用的时候再从中取出来, 一直到有一回, 他察觉到一盒尚未开封的试剂盒竟然出现了沉淀这种情况, 这才认识到保存的方法存在相应的问题。
做法正确的是, 对于未开封的试剂盒, 需严格依照说明书所推荐的温度来进行保存, 其中多数情况为4度, 然而存在一些具有特殊靶标的试剂盒则需要在-20度的环境下进行冻存。对于已经开封的试剂盒, 其里面所含的抗体以及酶标液要在分装之后才能够冷冻保存, 目的是避免出现反复冻融的情况。
后来, 老张在自己的实验室贴了一张表, 表上列有每个试剂盒的货号, 还有批号, 以及开盒日期, 甚至有效期, 他每周会检查一次。他讲, 不少人觉得试剂盒过了标称有效期便不能用了, 可实际上只要保存妥当, 多数试剂盒在有效期后一个月内依旧能够保持良好的活性, 不过前提是你要事先做过稳定性验证。
他面带笑容地讲, 别拿着你的实验去做赌注, 我曾经有过一次赌输的经历, 自此之后是再也不敢去进行赌博这般行为了。
从翻车到救车，老张的转变给了我什么启示
现在老张拥有比两个月前好了许多的心情, 他再次获得了可靠的数据, 项目进度也追赶回来, 上个月份, 他所在的团队运用新买的科研ELISA试剂盒完成了一整本临床前样本的检测任务, 最终得来的结果出色到让客户直接追加了订单。
被他邀请去吃了一回火锅, 吃饭期间他讲了一句给我留下深刻印象的话语, 那便是, 进行实验的人, 最为惧怕的并非失败, 而是不清楚之所以失败的缘由。试剂盒仅仅是一种工具, 关键之处在于你是不是自身具备将其运用好、把它选择正确的能力。
令我极其深切地认为这是对的。从事科研的这条道路, 不存在便捷的途径, 然而能够降低冤枉走的路。一篇质量优良的文章、一组值得信赖的数据, 其背后常常是经过一回回尝试犯错后所做出的明智抉择。要是你同样正为酶联免疫吸附测定试剂盒的挑选以及数据稳定性而苦恼, 不妨将老张的故事当作一面镜子, 映照一下自己当下正处于哪一个阶段。
希望下一次，你也能从翻车变成救车。
