我结识了一位名为老周的朋友, 他于华东地区的一家生物科技公司担任研发主管, 其职责是负责分子诊断产品的开发。我俩相识将近十年, 他这人在做事之际格外较真, 每当挑选试剂盒时都会进行反复对比, 简直是渴望将每一项技术参数都彻底弄明白。

今年三月初的时候, 老周突然在微信上面找我去吐槽, 讲他最近因为PCR定量试剂盒的选型方面的问题, 被弄得到了焦头烂额的地步。他们的公司刚刚承接了一个大的项目, 这个项目是要去开发一款针对呼吸道病原体的多重检测产品出来, 时间非常紧迫, 任务也很繁重, 可不巧的是, 恰恰是在核心原料, 也就是定量试剂盒的选择上面出现了阻碍。

选择PCR定量试剂盒有多难？

有个叫老周的人, 其所在的公司于生物医药这个行业范畴里, 算得上是处于中等规模的状态, 在此之前, 一直是运用进口的定量试剂盒, 这情形, 成本高暂且不表, 就连供货周期也是比较长的那种情况。在今年年初的时候, 公司的高层明确地提出了对控制成本的要求, 期望老周所在的部门能够尽快地寻觅到具备更高性价比的国产替代方案。

刚开始的时候, 老周认为这件事情并非具有难度, 在市场之上, 从事生产PCR定量试剂盒的厂家数量众多, 从中挑选几家实施试用此即可。然而，当真正着手开展这件事情之后, 才发觉, 实际情况远比预先所想象的要复杂得多。

他花费两周光阴之所, 经由不同途径获取七八个品牌的定量试剂盒样本 , 这些样本包含国内主流厂家的产品。而后他依据实验室的标准流程, 逐个检测这些试剂盒的灵敏度 , 与特异性 , 还有重复性。

结果致使令人头疼不已, 每个试剂盒自身具备不一样的优点以及缺点, 存在一种情况为灵敏度较高然而重复性欠佳, 另外存在一种情况是稳定性良好可是扩增效率较低。老周同团队成员持续不断加班以作测试, 历经一个多月时间, 数据累积形成了厚厚的一叠, 最终竟然没能寻觅到一款能够全方面适应他们项目相关需求的。

PCR定量试剂盒性能到底看什么指标？

周老年中四月的一回周末, 邀我外出饮茶, 谈及此事宜, 仍是满脸愁绪。他跟我讲, 实际上挑选PCR定量试剂盒的时候, 关键点要看三项指标, 分别是灵敏度, 线性范围以及抗干扰能力。

检测下限取决于灵敏度, 老周所负责项目对于核酸模板的检测要求是每微升必须检测到10个拷贝, 市面上多数试剂盒均可达成此项要求, 然而于现实条件下的样本里其表现存在极大差异, 部分试剂盒于纯化模板之时呈现较好情况, 可一旦遭遇复杂临床样本便显露出原本不佳之状。

线性范围与定量准确性有着直接的关联, 老周讲道, 有一款他们所测试的试剂盒, 在低浓度的区间之内误差超出了15%, 而对于那些需要精准判断病原体载量的应用场景而言, 这是根本无法接受的。

尤其是其抗干扰能力, 堪称是硬伤所在。老周所获取的样本当中, 时常会包含血液、黏液等各类干扰物质, 存在这样的状况, 部分试剂盒在这些条件之下, 扩增效率显著降低, 进而致使出现假阴性结果。

选用PCR定量试剂盒要注意哪些坑？

五月中旬时, 老周所进行的测试步入了白热化的阶段, 他同团队里的成员将选型的范围缩减至三家, 针对每一家都实施了最少三轮的平行比对。

首个坑是批间稳定性, 老周发觉, 就有一家公司的试剂盒而言, 不同批次中间 Ct 值起伏超出两个循环, 于实际应用当中这会带来严重的定量偏差。他们特意向厂家索要了三个批号的试剂盒来做对比测试, 其结果证实了他们内心的担忧。

第二个坑是引物探针兼容性, 老周的项目要同时检测四个靶标, 这就使得试剂盒得具备良好的多重扩增性能, 有一家试剂盒在单重检测时展现出突出表现, 可一旦进入多重体系, 非特异性扩增显著增多, 数据完全不堪入目。

第三个坑, 乃是冷链运输的可靠性, 老周跟我讲, 他们曾经收过一批试剂盒, 只因运输途中温度超出标准, 酶的活性遭受严重损失, 整批试剂宣告作废, 白白地浪费了三天时间。

PCR定量试剂盒国产和进口怎么权衡？

五月底的时候, 老周与团队终于是做出了决定, 他们最后挑选了一家国内头部企业的产品, 这家公司有着多个自主研发的核心酶专利, 其在行业里的口碑向来是不错的。

老周向我详尽剖析了此选择背后所蕴含的逻辑, 进口试剂盒尽管技术已然成熟, 稳定性也颇为良好, 然而其价格却是国产的二至三倍, 并且供货周期漫长, 遭遇突发状况时极难及时进行补货, 最为关键之处在于, 进口试剂盒的配方常常不予以公开, 一旦出现问题, 要进行调整会相当困难。

选的那款国产试剂盒, 两个多月严格测试后, 灵敏度成每微升5个拷贝, 线性范围覆盖5个数量级, 抗干扰能力较出色。个别指标和进口产品有差距, 所涉项目应用场景下完全够用。

六月上旬, 老周借助这款试剂盒达成了首批样本的验证检测, 成果极为理想。他特地发送消息告知我, 称此选择为公司节约了将近百分之四十的成本, 并且技术支持以及售后服务相较于进口厂家都要及时许多。

前不久的那一回碰头, 老周跟我讲, 关于挑选PCR定量试剂盒这个事儿, 从表面上去看, 好似是在挑产品, 实则是在挑合作的伙伴。而一个可以信赖的供应商, 不但能够提供质量稳定的产品, 而且还能在研发进程当中给予技术方面的支撑以及解决问题的方案, 这才是真正具有价值的地方。