那段时间, 老张给我通电话, 讲他搞课题陷入困境将近两个月, 精神状态糟糕透顶。他是我读研期间同实验室的好友, 过后来到省里一家从事生物技术的公司担任研发主管, 称得上行业里历经世事多年的熟练之人。他所遭遇的情形, 讲出来许多做细胞实验的朋友大概都会有相同感觉。
做一项有关组织修复的体外研究, 老张的项目需要大量的兔原代细胞, 起初他没太在意, 认为原代细胞按文献步骤操作就可以, 上手以后问题不断: 细胞得率低；只能勉强分出一批, 可贴壁率差；活性测量结果不理想, 这样折腾近俩月, 尝试三种酶消化方案与两批培养基仍未得到能够稳定增殖的细胞。
他跟我讲, 在那段日子里, 他差不多每日都呆在超净台跟前, 眼睛都因熬夜而发红了。最让他厌烦的是, 每回分离出来的细胞数量都并非稳定状态, 致使后续的实验规划一而再再而三地更改, 整个团队的进展都被耽搁了。老张讲, 他那时甚至疑惑是不是自身的操作方法有所退步了。
而后究竟怎么解决的呢? 是他所在公司的一位资深前辈前来进行指导, 提及当下行业范围内有人已然开始运用商业化的兔原代细胞产品, 而此种产品质量具备稳定性, 批次之间的差异极为有限, 能够有效省去诸多前期摸索所需的时间。老张最初的时候还认为使用商业细胞算是某种程度上的偷懒行为, 然而却难以承受项目所带来的压力, 最终还是尝试着采购了一批。
等到, 这一批兔原代细胞被拿到手上之后, 他万分惊讶地觉察到, 细胞的形态呈现出惊人的均一状态, 活力检测所获取的结果远远超越了预先的期望。他依据说明书当中所推荐的培养条件去进行操作, 细胞的贴壁速度极为迅速, 可以看到增殖曲线同样是极为美观非常漂亮的。老张讲, 就在那一个时刻他内心感觉自己在之前两个月所经历的辛苦全部都是白费了, 要是早一点知晓存在这样成熟的产品, 又何必自己苦苦死磕钻研呢。
兔原代细胞分离到底有多难？
后来老张找我一起复盘, 前期他那般痛苦, 关键是兔原代细胞分离没预想那般简易, 兔子组织致密程度、细胞脆弱性, 与小鼠、大鼠差异极大, 他起初按鼠源细胞消化条件处理, 结果细胞损伤惨重, 大量死去。
此外, 兔原代的细胞, 针对消化酶的浓度以及时间, 是极为敏感的。他曾试着把胰酶的浓度予以降低, 将消化时间缩短, 以此情况下，细胞却又不易从组织里完全解离, 致使得率极低。他随后查阅文献才明白, 不同的组织来源, 像肾脏、肝脏或者血管之类, 所需的消化体系差异极大, 根本不存在通用的简易方案。
为什么自己分离的兔原代细胞活性总是不行？
哪怕有幸地分离出充足数量的细胞, 活性的疑难状况接下来又出现了。老张察觉到, 他所分离出来的那些细胞, 存活率能够达到百分之八九十已然算是极为幸运了。许多情形下, 刚刚分离出来看起来状态尚可, 经过一夜的培养之后, 漂浮着的死亡细胞便会增多起来。
他剖析缘由, 一方面乃是操作进程里的物理损害, 像剪碎组织之际的机械力、反复吹打之时的剪切力, 这些都会致使细胞膜遭受损伤。另一方面, 不同批次动物的年龄、健康情形、饲养环境情况，会直接对细胞的质量形成影响。他曾有一回使用了一只年龄偏大些的兔子, 结果分离出来的细胞基本上全部老化, 根本没办法进行增殖。
原代细胞的批次稳定性有多重要？
老张对此感触极深, 这一点。他先前自行分离, 每次所获细胞数量不同, 活力各异, 生长特性也不一样。做实验之际, 最怕的便是变量无法控制。举例而言, 他开展药物处理实验时, 这周所分离的细胞对于某一浓度的药物反应甚好, 下周分离的细胞在相同条件下却毫无反应, 致使他根本难以分辨究竟是药物的问题, 还是细胞批次的问题。
他对我讲, 搞科研最为关键的便是具备可重复性。要是每回实验所采用的兔原代细胞自身并不稳定, 那么后续所有的数据就如同在沙滩之上盖楼一样, 随时都有可能坍塌。这同样是他在后来选择商业渠道的一个重要缘由, 因为别家能够给出详尽的质检报告, 其中纯度、活性以及特异性标记物都标注得明明白白的。
如何选择靠谱的兔原代细胞来源？
张三如今也算得上是半个行家了。他跟我说, 倘若要获取数量众多、稳定可靠、品质优良的兔原代细胞, 最为省心省力的法子的确就是寻觅专业的供应商。重点在于, 得瞧瞧对方能不能给出完备的溯源信息, 像是动物的品种、周龄、分离的方法、鉴定的数据。
而且, 最好挑选那些能够给予定制化服务的公司。某些实验需要特定组织来源的细胞, 像兔主动脉平滑肌细胞, 又或者兔心肌细胞, 常规的供应商不一定会有现货。能够依据需求迅速分离并且提供细胞的, 才是真正靠谱的。
他还特意提及, 运输以及复苏的指导也是相当重要的。有些细胞被买回来后, 因操作存在不当之处, 在复苏环节当中就损失了一多半, 那样可甚是可惜的。优良的供应商会给出详尽的复苏以及培养protocol, 甚至有技术支撑是能够随时去咨询的。
摆脱摸索期后，老张的实验终于步入正轨
在开始使用稳定的商品化兔原代细胞之后, 老张的项目前行进度显著变快。他不用再每日为细胞之事而担忧, 能够将时间以及精力汇聚于真正的实验规划方面。上个月的时候, 他给我发出消息, 声称第一批数据已然整理处理得当, 其结果相当令人满意, 连论文都已然着手开始撰写了。
他发出感慨称, 技术手段处于进步状态, 许多时候并非自身能力欠缺, 而是未曾寻觅到更为高效的解决办法。对于那般需要频繁运用兔原代细胞的研究者来讲, 去学会借助成熟的商业化产品, 实际上倒是一种更具智慧、更为高效的研究途径。说到底, 实验到头来要看的是结果, 而非过程里的辛苦付出。
