科研ELISA试剂盒，到底怎么选才不踩坑
那些从事科研工作的朋友都清楚, 实验数据的精确程度会直接对论文的走向起到决定性作用。去年年末的时候, 我有一位在生物公司搞研发的朋友老张, 他就险些由于试剂盒方面出现的问题, 而致使整个项目遭受失败的结局。
老张于杭州一家从事免疫诊断的公司工作了五年 , 其主要职责是专注于细胞因子的检测工作。他这人在做事方面较为靠谱 , 然而却存在一个毛病 , 那便是总是倾向于在试剂盒上节省开支。他认为不论怎样都是针对性检测同一个指标 , 国产的试剂盒价格更为便宜 , 所以能够节省的话就尽量节省一些经费。最终 , 这样的想法致使他遭受了巨大的损失。
买了便宜试剂盒，数据全废了
过去的去年那个九月月份之时, 老张接收到了一个涉及TNF-α于炎症这样的反应其中调控机制方式的项目。此项目时间紧凑紧迫, 任务繁重沉重, 他为了赶往前推进进度, 从某家并非太过于知名有名的较为小的厂子工厂采购了一批用于科研方面的ELISA试剂盒, 其价格确实低廉便宜, 恰好就只是三百多块钱一盒。
历经第一批样本的操作完成, 所呈现的数据看上去极为出色, 其发展趋势同样契合预先的期望。老张为此相当开心, 感觉像是占到了很大的便宜。然而, 当进入到重复实验的阶段时, 状况出现了——仍是相同的样本, 遵循一样的操作流程, 最终结果却相差了百分之三十还要更多。
重复三次数据对不上，导师怒了
老张起初觉得是操作有误, 于是再次配置了标准品, 进而调整了孵育时间, 并且将洗板的次数, 从原本的三次提升到了五次。然而, 不管怎样进行调整, 数据一直都不稳定, CV值也就是变异系数, 始终处于百分之十五以上, 而正常的试剂盒应当控制在百分之五以内呀。
这一回问题可严重了。他的导师, 也就是老周, 是个格外严谨的家伙, 瞅见那些数据之后, 直接就猛地拍了桌子, 大声质问: “你所做的这到底是怎样的一个实验? 这些数据如此杂乱无章, 究竟要怎样去发表文章? 又该如何去申请专利? ”。
那时的老张呀, 心里急切得恨不能寻个能钻进去的地缝, 他鼓起勇气, 硬着头皮再一次展开排查, 最终经过一番查找, 从中找到, 那些价格低廉的科研ELISA试剂盒里所包含的抗体效价存在极严重的不足状况, 其表现为检测灵敏度根本没办法去满足实验所提出的要求。
换品牌重做，一个月全白干
毫无办法, 老张唯有将先前一个月所作出的数据全部予以作废, 而后重新去采购试剂盒。此次他变得机灵了, 特意寻觅了在行业内部口碑良好的品牌, 像是R&D Systems以及Thermo Fisher的现货产品。虽说其价格贵出了许多, 每一盒得要一千多, 可是好在具备稳定性。
在重新开展实验的那段日子里, 老张差不多每天都待在实验室里头。从对样本进行稀释开始, 一直到绘制标准曲线, 每一个步骤他都谨慎小心、全神贯注。还好在更换上了质量可靠、令人放心的科研ELISA试剂盒之后, 所获取的数据最终呈现出了稳定的态势。重复实施三次操作所得到的CV值均被控制在了百分之三以内, 而且标准曲线所对应的R²值同样也达到了0.999以上。
为什么试剂盒的选择决定实验成败
把事后老张对我讲的话进行复盘, 总结出了几点经验, 他讲, 科研ELISA试剂盒所重视的并非是价格, 而是批间一致性, 每一批大品牌的试剂盒在出厂之前都会开展规范严格的质控, 以此来确认不同批次的试剂盒探测结果的差异处于可承接的范围之内, 然而小厂所生产的试剂盒, 或许连最基础的抗体配对都未曾进行充足的验证。
提及的另外一点乃是关于灵敏度的状况。老张所进行研究的TNF-α, 于细胞上清里其浓度处于极度低的水平, 仅有几十皮克每毫升。价格较为低廉的试剂盒, 其检测下限过高, 基本压根无法检测低浓度的标本, 仅仅只能凭借误差去“制造”试验数据。
看看这些坑，你踩过几个
后来老张又讲了相关情况, 他说他知晓不少同在从事相关工作的人搞这一套会出现类似失误。有人选取的科研ELISA试剂盒, 在把标准品进行复溶之后刚一弄好就出现了沉淀, 这意味着蛋白已然发生变性的状况了；还有人所测出的OD值, 也就是光密度值, 其中出现偏离常规数值的情况特别多, 在对板条冲洗的过程里才发现板条存在吸附能力并非良好的情形。
更为夸张的是, 有个师弟购置到的试剂盒, 其说明书之上所写的检测范围是每毫升15.6至1000皮克, 然而在实际操作期间发觉, 于低浓度区域的标准曲线几近是一条水平线, 根本没办法检测出来。用这种试剂盒去发文章, 审稿人一眼就能瞧出问题。
怎么判断试剂盒靠不靠谱
老张此刻挑选试剂盒, 存有自身的一套思路。首先得考量品牌过往经历以及市场的评议, 绝不仅仅注重价钱。其次需查验试剂盒有无第三方独立所验证的数据, 像是有没有通过ISO13485认证。反之还要索取免费样本进行测试, 不要径直大批量去采购。
他特意着重提示, 于购买科研ELISA试剂盒的情况之下, 需将保存条件以及有效期询问明晰。存在一些小型厂家, 为了达成成本降低的目的, 会使抗原抗体长时间放置于不合适的那个温度里, 实际上其活性早就下降到几乎没有多少的程度了。
现在的老张，已经成了试剂盒选购专家
经过那次教训之后, 老张如今在公司当中变为了试剂盒采购方面的“把关人”。上个月的时候, 他才帮实验室挑选了一批用于检测IL - 6以及IL - 8的科研ELISA试剂盒, 且全部选用的是经过国际文献验证的品牌。项目进展极为顺利, 第一批数据便获得了导师的认可。
他背着别人跟我讲, 那一个月毫无收获的付出虽说令人心疼, 然而换个方面去看待, 倒也算是件不错的事。这可比在发表论文之前才察觉到问题要好太多了, 不然那才是实实在在丢尽脸面的情况呢。
倘若你同样在进行细胞因子、炎症因子或者与之的相关蛋白的检测, 记好老张所说的话: 科研ELISA试剂盒能够节省费用, 然而绝不该在质量方面有所节省。实验数据所具备的可靠性, 是任何一笔经费都没办法兑换回来的。
