前言：为什么这篇文章值得你花十分钟读完？

倘若你正因为实验数据呈现出不稳定的状况, 或者试剂盒的灵敏度达不到要求, 又或者供应商缺乏靠谱性而感到头疼不已, 那么这篇文章便是专门为你所撰写的。我结识了一位身处于生物行业历经摸索打拼长达八年之久的朋友老周, 他近期刚刚亲身遭遇了一场围绕荧光定量PCR试剂盒展开的选型方面的风波。从伊始险些遭受欺骗, 一直到最终成功寻觅到最佳解决方案, 他那段亲身经历几乎全面覆盖了你在选购试剂盒期间将会遭遇的每一处陷阱。当你看完他所经历的这段故事之后, 你起码能够避免走上一段长达半年的弯路。

我那个“踩过雷”的朋友老周

我在前东家认识的老同事老周, 如今是华东一家第三方医学检验所的实验室负责人, 今年年初, 他们实验室承接了一个大单, 此单子乃为某省级疾控中心提供一批呼吸道病原体的荧光定量PCR检测服务, 单子金额不小, 然而时间紧迫, 样本数量庞大, 对试剂盒的稳定性有着极高要求。

当初老周跟我讲, 说道: “这一回的这批样本的话, 一旦出现问题, 那么我们实验室的那块牌子就会被砸掉啦。”。

选购荧光定量PCR试剂盒时，我朋友第一步就踩了坑

荧光定量PCR试剂盒的灵敏度到底重不重要？

老周原来使用的是那种有着较长历史的进口试剂盒, 其供货向来保持稳定状态。然而在今年年初的时候, 供应商突然间告知他关于成本出现上涨情况, 然后表示单单价格就要上涨百分之四十。老周在心里仔细地进行了一番盘算推算, 发现这个项目的利润原本就并非很高, 如果依照这样的价格去进行操作, 那么做一笔单子就会亏损一笔单子。

于是, 他着手寻觅起替代品来, 市面上国产荧光定量PCR试剂盒在这些年里发展得极为迅速, 其价格大概仅为进口的一半, 老周怀揣着试试看的心理, 经由朋友的推荐与一家新厂商有了接触。

在首次进行测试之际，厂商所提供的样品展现出的状况还算可以。然而, 老周却遗漏了最为关键的那一点, 即他未曾开展大批量的稳定性验证。

大批量检测时，试剂盒的稳定性为何容易翻车？

项目正式启动后的第三天，问题就来了。

那天, 老周于实验室之中一直待到凌晨两点, 目光紧盯着荧光定量PCR仪上面的扩增曲线, 其脸色逐渐愈发难看。同一批样本, 不同孔位的Ct值竟然相差了整整2个循环, 此情况意味着在这一批样本里头, 有些样本将会被判断为阳性, 而有些样本则会被认为是阴性, 从而彻彻底底地失去了相互间的可比性。

而后老周跟我讲, 那时他冷汗已然下来了。这一批样本次日便要出具报告, 要是数据并非可靠, 不但得赔钱, 而且还会得罪客户。

荧光定量PCR试剂盒的批间差如何影响实验结果？

批间差大，实验数据能信吗？

当夜, 老周费尽周折翻找出厂商的质检报告。他察觉到, 此批次试剂盒的批间差数据并非令人欣然接纳之物。那所谓的批间差, 直白来讲, 乃是同一批试剂盒于不同生产批次之际所呈现的性能之差异。批间差大这种情况预示的情形表明, 此番实验的结果与下一回实验的结果极有可能全然无法契合。

在荧光定量PCR这般具备高灵敏度的检测里头, 批间差属于隐性杀手, 它并非如同灵敏度低那般, 能够一眼就被识别出来, 然而它可以致使你的整个实验丧失重复性, 对于第三方检测机构来讲, 重复性差等同于没有公信力。

彼时, 老周当即做出一项决定, 那便是停止该供应商所供应的试剂盒, 转而再度启用原本的进口品牌, 与此同时, 紧急去联系新的国产供应商。

我朋友是如何找到靠谱的荧光定量PCR试剂盒的？

选荧光定量PCR试剂盒，到底要看哪几个指标？

历经这一回折腾, 老周针对选型确立了严谨的标准, 他跟我讲, 当下他挑选荧光定量PCR试剂盒的时候, 会着重去看三项指标:

有一个叫做灵敏度的, 是那种硬指标性质的, 它必须得达到单拷贝检测的级别才行的。老周讲了这么一件事, 好多厂商进行宣传的时候, 都会宣称自身灵敏度是很高的, 然而在实际跑一下的情况下, 低拷贝的样本常常就出现漏检的情况了。

批次之间的差异。老周当下要求供应商给出连续三个批次的质量检验报告, 批次和批次之间的CT值波动一定要小于0.5。要是没办法达到这一要求, 便会直接将其排除。

稳定性验证, 不是进行一次测试就歇手, 而是得连续运行三周, 每周要超过50个样本, 去观望数据的一致性。

如何判断荧光定量PCR试剂盒的供应商是否靠谱？

老周随后借助行业里的一个同行群组, 寻得了一家口碑良好的国产制造商。该制造商的销售经理并未夸夸其谈, 而是径直给老周邮寄了三批不同批次号的试剂盒, 还附带了详尽的质量控制数据。

另老周更为放心的是, 该家厂商的技术支撑主动提出, 前往实验室现场配合验证。老周讲道, 这种姿态自身便表明, 他们对自身的产品怀有信心。

结果验证出来之时, 老周满心尽是满足之感。对于三批的试剂盒, 灵敏度方面达标得以实现、特异性方面达标得以达成、批间差方面同样达标得以完成, 甚至其在低拷贝样本之上的表现, 远比进口品牌还要优良些许。

老周现在怎么用荧光定量PCR试剂盒做实验？

荧光定量PCR试剂盒的正确使用流程是什么？

老周现在给实验室定了一套标准流程：

第一个步骤是, 每当有货物到达之后，首先要去做那种小批量类型的验证, 使用已知浓度的标准品去跑上一回, 以此来确定试剂盒的性能是不是与质检报告相一致。

第二步, 在每次进行实验之前, 都要去做一次标准曲线。老周讲, 有许多实验室为了图省事, 会使用之前就已经做好的标准曲线。然而不同批次的试剂盒, 其扩增效率搞不好是不一样的, 使用以前的曲线就会把误差给引入进来。

第三步, 每时的实验都要去设定阳性以及阴性的对照, 这看上去好像是挺简单的, 然而老周却察觉到, 好多的实验室为了能够节省金钱以及省事, 就会去削减对照的孔位。如此一来结果出现了问题, 根本就查找不出来究竟是试剂盒的问题还是操作方面的问题。

老周现在的实验数据稳定了吗？

荧光定量PCR试剂盒用对了，实验效率能提升多少？

自打更换了新的试剂盒, 并且把流程给规范了之后, 老周所在的实验室就再也未曾出现过数据波动的情况。就在上个月, 他们的那个省级项目顺利地完成了结项, 客户对于数据的重复性以及准确性感到极为满意。

老周进行了一次算账, 新试剂盒的价格是进口品牌的百分之六十, 然而性能并非存在差别, 依据他们实验室每年的试剂盒消耗数量为两千个来计算, 一年仅仅试剂盒这个方面的费用就能够节省近乎四十万。

尤为关键且重中之重的一点在于, 鉴于相关数据始终保持稳定, 在实验室范畴之内, 对应客户的投诉比率, 由原本的百分之五, 已然降低至近乎于零的程度。老周明确声称, 表示这才是于选型这一环节之上投入精力所具备的现实本真价值所在。

结尾：荧光定量PCR试剂盒选型，关键是“验证”二字

老周所历经的事情, 实际上给咱们所有人都投送了一个提醒, 在荧光定量PCR试剂盒的挑选方面, 千万永远都别单单仅凭看着价格以及宣传所用的资料来进行抉择。而真真切切实实在在的考验, 却是源自于大批量的状况下、长时间的范畴之中、好多批次时经历的验证呀。

要是此刻你正为试剂盒挑选型号而犯愁, 那不妨先自行询问自身下述三个问题: 你的供应商有没有胆量交出具备连贯性的三个批次的质检报告? 你开展过超越50个样本数量的稳定性测试吗? 你所拥有的实验数据究竟有多少次是值得信赖的?

把这三个问题考虑明白, 你的选型便不会出现偏差。老周讲, 他如今每次碰到新供应商, 都会率先询问这三个问题。只有能够回答上来的, 方才值得投入时间做进一步的了解。