我在生物公司搞研发之际结识的同行老张, 他投身此行业将近十年, 往昔于北方一家第三方检测机构出任技术主管, 司职食品安全项目的 ELISA 检测。他这人做事极为较真, 每回挑选试剂盒都必定再三对比, 旁人皆认为他着实磨蹭, 然而他宣称: “ELISA 检测试剂盒倘若选得不妥, 实验的结果会差达十倍, 这真是绝非戏言。”。
去年的秋季时节, 老张承接了一项规模较大的项目, 该项目是要对于一批将要出口的谷物做真菌毒素的筛查工作。甲方所提出的要求极为严格, 不但检测限必须要低, 而且还需要在两周的时间内出具完所有的报告。老张在最开始的时候认为此问题不算大, 毕竟他手头上一直所使用的那款ELISA检测试剂盒已经使用了一年多的时间, 其灵敏程度还算可以, 并且操作也较为熟练。可是当第一批样品进行检测之后, 其结果就让他开始有些坐不住了。
ELISA检测试剂盒的灵敏度到底重不重要？
做完第一批样品, 老张发觉有数目不等的几个样本的数值, 始终在临界线附近浮动, 再次检测之后, 状况仍然含糊不清。他对我说: “你把这种结果交上去, 甲方肯定会找碴儿。说合格, 数据并不干净清晰说不合格, 确实又没有超出标准。”他心里明白, 问题是出在试剂盒的灵敏度方面。
他先前使用那家的一款试剂盒, 其标称检测限为5ppb, 然而实际使用过后, 低浓度样本的变异系数却愈发涨大。老张随后跟咱讲, 对于ELISA检测试剂盒而言, 其灵敏度直接规定了你能不能辨别出浓度较低的阳性样本。要是灵敏度不足够, 浓度偏低的阳性样本极易被错误判定为阴性, 这样的风险在食品安全检测当中是具有致命性的。
不同品牌ELISA检测试剂盒效果差在哪？
起初, 老张进行自我反思, 思考是否应当更换一个试剂盒来尝试。随后, 他与几个从事 ELISA 检测工作的朋友取得联系, 询问他们各自所使用的是什么牌子。其中有人表示使用进口的, 声称它虽然具有稳定性但价格昂贵；另外有人则说使用国产某品牌的, 认为其性价比颇为不错。老张陷入了犹豫之中, 毕竟公司的预算存在限制条件, 倘若更换为价格昂贵的后怕遭受领导责备与批评, 要是更换为价格便宜的又担心陷入质量问题的困境之中。
之后, 他从朋友那里借回来几个属于不同品牌的 ELISA 检测试剂盒, 拿回自己那里去做了一轮对比测试, 他挑选了同一个被界定为阳性的样本, 使用四个不同牌子相关试剂盒各自进行了一遍检测流程, 最终呈现出的结果差异确实比较大, 其中有两款试剂盒的灵敏度明显是不够的, 对于低浓度样本直接给出阴性的检测结果，有一款试剂盒背景值过高, 所产生的阴性对照结果都出现了异常浮动情况, 只有一款试剂盒不管其检测过程中表现出来的灵敏度还是检测结果的重复性表现, 都令人感到满意。
老张跟我讲, 不一样品牌的ELISA检测试剂盒之间存在的差异, 重点体现于抗体原料以及包被工艺方面。质量优良的试剂盒, 其抗体具备较强的亲和力, 在结合非特异物质时数量较少, 背景呈现出干净的状态, 只有如此, 你的数据才能够具备说服力。
ELISA检测试剂盒的操作步骤会不会影响结果？
确定了品牌之后, 老张觉得一切都没问题了, 然而在正式进行批量检测之际, 又出现了意外状况。那一天, 他安排了两名新入职的技术员, 同时对一批样本展开操作, 结果两名技术员检测出来的数值, 相差了许多。老张愤怒到了极点, 把两个人都喊到面前, 询问他们每一个步骤是如何进行的。
一经检查才发觉, 问题存在于洗板以及孵育时间方面。有一个人在洗板之际多洗了一回, 另外一个人在孵育之时忘记盖上盖子。老张随后跟我发出感慨称: “ELISA检测试剂盒的操作流程看上去简便, 然而任何一个环节出现差错, 结果都会发生变化。特别是洗板, 洗多了易于把结合物冲洗掉, 洗少了背景过高, 孵育时间的长短会直接对显色深度产生影响。”。
那段时间的时候, 他选择在此之后专门针对团队开展了为期两天的操作培训工作, 将每一个步骤当中应该注意的相关事项全都整理撰写成为了SOP, 然后张贴在了操作台前这个地方。自那之后过了一段时间以后, 数据才渐渐地慢慢稳定了下来。
ELISA检测试剂盒的保存条件有什么讲究？
回忆起更早一件事的老张，去年夏天的时候, 实验室的空调坏了一整天, 室温一下子飙到了三十七八度的程度。等到他发现的时候, 仓库里面还遗留着好几盒尚未开封的ELISA检测试剂盒。他急忙去查说明书, 发现保存条件是2到8度, 一旦超过这个温度稳定性就会逐渐下降。
他跟我讲, ELISA检测试剂盒实际上就是抗原抗体反应, 抗体属于蛋白质, 高温且时间久了就会发生变性。那批试剂盒后来虽说没被扔掉, 不过老张此后再也没敢把它们用于正式实验, 仅仅拿来做内部练习。自那之后, 他制订规定, 所有试剂盒到货后必须立刻入库登记, 并且贴上到货日期以及保存要求, 过期或者存放不妥当的坚决不予使用。
如何判断ELISA检测试剂盒的质量好坏？
遭遇了这一系列事情, 老张针对 ELISA 检测试剂盒选取标准愈发明晰。随后他跟我归纳了几条经验: 其一, 查看批内以及批间变异系数, CV 值越低越理想；其二, 考量灵敏度, 可否契合你的检测下限需求；其三, 关注回收率, 加标回收率能够体现试剂盒的准确性；其四, 留意背景值, 阴性对照的 OD 值越低越适宜。
他如今每回挑选 ELISA 检测试剂盒时, 都会先行开展一回小范围验证, 将已知浓度的阳性样本进行一次检测, 确定各项指标均可接受, 之后才敢应用于正式项目之中。他讲道: “宁愿在前期耗费三天进行验证, 也不情愿在后期花费一个月进行返工。”。
今年年初时 , 老张的那个出口项目 , 顺利完成验收了。甲方对于他们所提供的数据 , 表现得很满意 , 并且还主动续签了 , 下一年的合作合同。老张在年会上 , 被领导点名进行表扬 , 他私下跟我讲 , 实际上真正帮他顶住这个项目的 , 就是那款后来换上的 ELISA 检测试剂盒。工欲善其事 , 必先利其器 , 这句话放在实验室里面 , 一点都不假。
