这篇文章能帮你省下多少冤枉钱

那些从事生物实验的朋友都心里有数, ELISA检测试剂盒此物, 瞅着好像没啥不同, 然而用起来其差异会让你对人生产生怀疑。我的友人老张, 从事免疫检测工作达八年之久, 仅仅是更换试剂盒就换了五家, 所经历的挫折足以写成一部饱含血泪的历史。今日我将他的经历详细剖析讲述, 你依照此经历走上一遭, 起码能够少走三个月的弯路, 节省下两万块用于试错的费用。

一个老检测员的窘境

老张身为杭州一家第三方检测实验室的技术主管, 负责食品安全相关的免疫检测项目, 去年三月份, 他们承接了一单大客户的黄曲霉毒素B1筛查, 样品量两千多份, 工期紧迫, 老张当时手头使用的是一款国产ELISA检测试剂盒, 价格低廉, 一片板子不到三百块, 他使用了大半年, 一直感觉尚可。

结果那批样品刚跑完一半光景, 问题便冒出来了, 就是标准曲线的线性愈发糟糕, 复孔之间的变异系数一下飙升到百分之十五以上。老张一开始觉得是操作有误, 重复操作了三遍, 数据仍旧如同起伏颠簸如同过山车一般。他连夜展开详尽排摸调查, 最后确定是试剂盒自身出现了问题, 那就是同一批次不同板子之间的批间差别大得实在离谱, 低浓度样本的吸光度数值几乎没有什么变化。

为什么换了三家供应商还是不行

老张着手更换供应商, 首先更换成了一个国际大牌, 其价格贵了达三倍之多, 一片板子要九百多元, 然而数据的确稳定, 批间差控制至百分之五以内, 老张咬着牙使用了两个月, 结果客户那边反馈, 有几批样品的检测结果与他们自己运用液相色谱所做的结果不一致, 老张反复进行核对, 发觉是试剂盒的基质效应太过强烈, 样本稀释液和标准品的基质匹配程度不足, 致使高浓度样本被低估。

第二家更换成了一个宣称“专做复杂基质”的国内品牌, 其宣传页之上填充了诸多动听至极的言辞。老张率先购置了两盒展开试用, 针对动物血清样本而言表现尚算差强人意, 然而, 当转换至植物提取液样本之时, 背景值高得出奇, 非特异性结合状况极为严重, 即使用他们所提供的封闭液予以处理三次也无法将其压制下去。老张与他们的技术支撑展开沟通交流, 对方却要求他自行去优化稀释倍数, 刹那间, 老张的内心顿感凉意丛生——对于一个ELISA检测试剂盒来讲, 倘若连最为基本的封闭都无法妥善完成, 又何谈专做复杂基质呢。

关键转折点出现在深圳的一次展会上

去年六月, 老张前往深圳, 去参加一场食品安全检测技术展会。展会上, 在一个展台前, 老张停步了, 原因是展商正在演示一项操作细节。这项操作细节是, 展商用一块板子, 同时开展了人血清与牛血清的对比测试, 测试进行过程中, 中间并未有任何关于清洗步骤的调整, 最终呈现出两条标准曲线几乎处于重合状态。老张当时便产生了兴趣, 随后跟展商的技术负责人交流了将近两个小时。

由该作为负责人的人, 向老张讲述了一个问题, 这个问题是老张以前从来没有十分认真去思考过的, 即ELISA检测试剂盒, 它的核心并非仅仅是抗体, 而关键在于整个系统的平衡状态。好多试剂盒的抗体来源是不错的, 然而封闭液 、稀释液以及洗涤液这三者之间的配比, 是抄袭而来的, 并没有针对特定的样本类型开展过系统性的优化工作。举例来说, 倘若你所检测的是血清样本, 血清之中存在着诸多结合蛋白, 要是封闭液里面没有充足的中和剂, 那么非特异性结合便会将信号给淹没掉。

在当场, 老张要了两盒带回去用于测试。他对实验室里最令人头疼的三种样本类型进行了一遍操作: 分别是动物血清、植物提取液、发酵液为样本来实操。结果出乎他的意料——植物提取液样本的背景值仅是之前那家公司的五分之一, 动物血清样本的标准曲线R方值达到了0.998, 发酵液样本的回收率稳定处于百分之九十五至一百零五之间这般情形。更为关键的是那批间差被控制在百分之三以内, 同一个操作员用三批不同板子去跑同一批样本, 数据几乎展现没有波动的状况。

回到实验室后的全线更换

回去之后的老张, 花费了两个星期，将实验室里全部的ELISA检测项目都重新进行了验证。他制作了一个表格, 针对之前的那家国际大牌以及这家新供应商的数据, 做了对比。结果发现, 后者在基质匹配度、批间稳定性、操作宽容度这三个维度上, 都显著地更好。并且其价格只有前者的一半还要多一点。老张向老板汇报结束后, 当月就把主要项目的ELISA检测试剂盒, 全部替换成了这家。

今年年初的时候, 我前往他的实验室去参观, 他当时正在操作一批黄曲霉毒素B1的盲样考核, 他向我展示了他当下的操作流程, 从样本前处理开始, 一直到加样孵育步骤为止, 整个流程缩短了四十分钟, 这是由于新试剂盒的洗涤次数从五次降低到了三次, 封闭时间也从六十分钟缩短至三十分钟, 并且不需要额外添加封闭液。老张讲道, 以前更换试剂盒时总是担忧数据会出现波动, 而如今更换之后, 反倒觉得以前那些问题压根就不是问题了。

选ELISA检测试剂盒到底看什么

历经一年多时间, 老张更换了五家试剂盒供应商, 经归纳得出的经验是, 既不可单纯着眼于价格与品牌, 又不可只看重抗体的来源。实际上, 判定一个 ELISA 检测试剂盒是否好用, 取决于三个方面: 其一, 试剂盒针对你常用样本类型的基质匹配程度；其二, 批间差控制能力, 这直接决定了你能否安心地进行跨批次对比实验；其三, 操作宽容度, 也就是不同操作员、在不同时间点做出的结果一致性高低。

老张讲道, 往昔他一直以为试剂盒不好用乃是自身的缘故, 往后才发觉，极有可能是试剂盒自身的设计未曾针对实际应用场景予以优化。他如今的准则是, 首先得要有两盒测试样本去进行验证, 待数据运行顺畅了再进行批量采购。此方法听闻起来较为简易, 然而他亲眼目睹实验室里好几个同事因节省那两盒试样的钱, 最终所赔进去的时间成本以及样品成本却是十倍往上不止啊。

倘若此刻你同样正为酶联免疫吸附测定检测试剂盒有着怎样的稳定性而发愁, 那不妨去效仿老张的做法, 耗费两周的时长开展一次横向对比测试操作吧。数据是不易弄虚作假的, 质量优良的试剂盒, 只需进行一次测试便可知晓究竟如何了。