引言：这个方法值得你看完
上星期三, 我跟一位相识已久的朋友于国贸周边就餐, 这位朋友名为老陈, 在一家从事生物科技事宜的公司担任研发主管一职。用餐期间他发出了这样一番感慨: “假若是提前两年知晓科研ELISA试剂盒该如何进行挑选, 我那时负责的项目压根儿就不会拖延长达半年之久。”他所讲的这句话使我产生了这样一种认知, 即他所经历过的那些挫折、摸索总结出的办法, 对于像你我这般从事科研工作的人而言, 兴许比去研读十篇学术论文所具备的价值还要高。因而我将他的相关经历予以梳理整合, 期望能够助力你避免走弯路。
老陈的工作：从实验员到项目负责人
头一回说, 老陈今年三十四岁, 是学习分子生物学出身的, 毕业之后, 先是在一家CRO公司干了五年, 两年之前, 跳槽到一家做肿瘤标志物检测的初创公司任职。目前, 他担任研发主管。他的核心工作呢, 是带领三个实验员, 运用科研 ELISA试剂盒开展各种靶点筛选以及验证工作。简单讲, 就是使用该试剂盒测定那些与肿瘤相关的蛋白表达水平, 进而为下游的临床前研究提供数据进行支持, 这可不是瞎搞, 都是经过科学验证的。
经常跟我抱怨的他说道: “不要小瞧这个试剂盒, 它可是整个项目的起始点。起始点一旦偏了, 后续的一切就全都白费力气了。”。
他遇到的第一个困境：试剂盒总是不稳定
去年九月的时候,老陈承接了一个新项目, 该项目需要去检测一种新型免疫检查点蛋白在肺癌细胞系上的表达差异情况。他们所使用的是市面上相对比较主流的一款科研ELISA试剂盒, 然而, 令人感到奇怪的是, 当第一批数据被做出来之后, 变异系数显得特别大, 其中有的孔信号高得十分离谱, 这种高的程度超出了正常范围, 而有的孔信号却又低得犹如空白对照一样, 几乎没有明显信号。
那时, 老陈于电话里对我说, 当时他觉得那是操作方面的问题, 遂让组里最为细心的姑娘再度做了一回, 然而结果依旧相同, 标准曲线相关系数仅能达到0.95, 根本没办法继续推进。
他尝试过更换批次, 尝试过更换稀释液, 甚至尝试过更换一种更为昂贵的进口试剂盒, 可是问题一直都没有得到解决。那段时期, 老陈所承受的压力格外巨大, 项目的节点处于卡死状态, 老板每日不停地催促, 他每日都会在实验室一直待到夜里十一点, 整个的人瘦了十斤。
转机出现在一次展会交流
十一月刚开头, 老陈走上了前往去参加在上海所举办的一个关于生物技术方面展会的路途中。在展区里毫无目的随意闲逛溜达的时候, 他碰到了一位以前在同行的公司里从事技术工作的师兄。两个人围绕着科研ELISA试剂盒的那种稳定性方面问题展开了交谈, 师兄对着他讲道: “你所面临的那个问题, 我在去年的前年就已经碰到过了。后来经过探寻发觉, 并非是试剂盒自身没有达到应有的标准, 而是你所采用的样本前处理方案跟试剂盒之间存在着不相匹配的状况。”。
当时师兄向他给出建议, 建议他去试着看看更换一套专门用来进行样本处理的缓冲液, 与此同时还要小心留意每一批试剂盒的货号对应状况, 不能够将不同批次的组件进行混合使用。老陈于当时处于半信半疑的状态, 不过反正也没有别的可以采用的办法, 于是就返回去进行尝试了。
关键尝试：换方案后的第一次成功
回到实验室之后, 老陈依照师兄给出的建议, 再度调整了样本裂解以及稀释步骤, 并且特意跟供应商确认了科研 ELISA 试剂盒的批次一致性。而后第二次进行跑板, 标准曲线相关性径直达到了 0.998, 所有样品的复孔差异均处于 5%以内。
后来, 老陈在微信上跟我说, 那天下午, 我看着数据, 差点哭了, 你知道那种感觉吗, 不是技术多牛, 而是终于找到了问题的根。
他进行了一番总结, 在不少时候, 科研ELISA试剂盒出现问题, 并非是在于试剂盒本身, 而是由于操作者忽视了“人机料法环”当中的“法”以及“料”, 样本处理有失妥当, 试剂批次错误性混用, 孵育时段不够精准之情况便出现了, 这些细节乃是看不见的杀手。
踩坑后的方法论：他总结了三句话
那次过后, 老陈针对科研ELISA试剂盒的选用形成了属于自己的一套流程, 他告知给我, 能够归纳为三句话:
先确定需求, 再去挑选品牌, 不要盲目地迷信进口的货物, 有些国内生产的试剂盒, 在某些特定靶点上的灵敏度以及特异性, 实际上是更好的, 关键之处在于, 要看你所检测的对象, 还有样本的基质。
对批次验证而言, 是绝对不能省略的。每当抵达一个全新批次的试剂盒时, 都务必要先运用已知浓度的标准品去开展一次涵盖全部流程的验证工作, 只有在确定标准曲线形态以及灵敏度均达到标准要求之后, 才能够将样品投入使用。
要对样本处理进行标准化, 老陈如今给团队制订了一项规矩, 所有的样本都得采用同一种裂解液, 运用同一种稀释比例, 处于同一次的离心条件之下从而最大程度地去减少系统误差。
现在他的团队效率翻倍
一直到今年四月的时候, 老陈负责的项目已然顺利推进到了体内验证的阶段, 他所在组里有三个实验员, 每一个人每一天都能够稳定地跑两到三块板, 所得到的数据重复性相当不错, 就连老板看了之后都点头表示认可, 他最近还牵头制作了一个科研ELISA试剂盒的供应商评估表, 计划从今年下半年开始, 将所有常用的试剂盒都进行一次横向对比, 从而彻底解决历史遗留下来的问题。
上周, 我跟他进行了电话沟通, 那时他面带笑意宣称, “当前哪一家试剂盒出现了状况, 我大体上瞅一眼数据分布情形, 便能够推断出是哪一个步骤操作有误。”他讲的这番话语虽说有点张狂, 然而我心里明白, 他是切实跨越过了那道难关。
总结：对做科研的你有什么用
老陈所拥有的经历实际上是特别贴近现实生活的表现。用于科研的ELISA试剂盒这一工具, 讲它简单的话确实有着简单之处, 说它困难的话那也是存在困难之点的, 困难的地方在于, 当你把全部的变量都进行有效的控制把握住之后, 它才能够在输出方面保持稳定状态。要是你同样正遭受着试剂盒的数据不稳定以及重复性极为差劲的状况而被弄得疲惫不堪, 那么不妨先停顿下来, 去对样本处理流程以及批次管理进行一番检查, 有可能问题的根源就在这一系列之处哈。
终究, 实验能否成功, 常常并非取决于高端大气上档次的仪器, 而是在于那些你平常最不予以重视的细微情节之中。
