上月的时候, 与具有五年相识时长的老李，给我拨了一通电话, 其语气之中充斥着懊恼之情。他于一家从事生物技术的公司担任研发主管一职, 手头正忙着一个针对肿瘤药物筛选的项目, 然而由于所选用的细胞株存在差错, 致使整个实验数据被判定无效, 白白耗费了长达三个月的时间成果付诸东流。
那位被称作老李的人, 在做事方面向来都是极为谨慎小心的, 怎么竟然会在肿瘤细胞株这种作为基础的资源上面出现失误呢? 当他和我进行详细复盘的时候, 讲了一句给我留下深刻印象的话语, 那就是: 不是像购买白菜那样, 觉得只要细胞株的名字对上了便可以, 谁能想到最终基因型竟然都不匹配。
他所踩的首个坑, 在于贪图便宜, 老李团队经费存在限制, 他经由一位同行予以介绍, 而后从一家小型供应商处购得了人源肺癌细胞株A549, 价格着实低廉, 对方并且承诺“保证活性”, 然而实验进行到一半的时候, 关键靶点始终未曾出现信号, 拿去做了STR鉴定, 这才发觉细胞早就被HeLa污染了。
老李讲这话之际, 已然抽了好些根烟, 他说道, 三个月的数据全然作废, 还得重新去采购肿瘤细胞株, 团队的士气都已然崩溃了。那时我询问他, 后续是怎样解决的呢? 他面带苦笑地讲, 只能再度去挑选渠道, 此次他学机灵了, 径直去找了具备权威细胞库认证的供应商, 哪怕多花费一些钱, 也要拿到带有STR鉴定报告的货品。
然而, 事情进展到此处并非就此结束。老李第二次所进行采购的物品乃是胃癌细胞株MKN45, 此次, 货物已然抵达, 鉴定报告同样存在, 可是, 接手该项事务的他的同事有所疏忽, 在拿到细胞之后, 并未开展常规的支原体检测, 便直接进行传代操作。经过两轮传递之后, 细胞的状态能够通过肉眼明显察觉到变差, 贴壁的比率出现下降, 增殖的速度同样变得缓慢。经过一番检查, 结果显示支原体呈阳性。
“那会儿真恨不得给自己一耳光。”老李讲道, 他心里清楚肿瘤细胞株拿到手之后必定得亲自开展一轮质量控制, 然而为了加快进度, 他越过了这个环节。其后果便是, 这一批细胞同样无法使用, 只能再次去购买。
随后, 我陪着他前往了一趟上海, 去参与一场肿瘤研究技术方面的交流会。在这个会议上, 有一位从事细胞库管理工作的专家讲述了一个事例, 有某个课题组, 因为使用错误的细胞株, 致使后续发表的论文遭受撤稿处理, 那整整四年的研究成果就此付诸东流。老李听完, 脸色随后就发生了变化, 回来之后便跟团队确立了新的规定, 任何肿瘤细胞株进入实验室时, 势必要做三件事情, STR鉴定、支原体检测、短串联重复序列比对, 缺少其中任何一项都不行。
此刻, 老李所负责的项目终于步入了正常的轨道。在上个月期间, 他运用新购置的肝癌细胞株HepG2开展了一轮药物筛选工作, 所获取的数据十分出色, 进而得到了领导的赞扬。他私底下对着我讲, 幸亏经历了那次遭遇挫折的情况, 不然直至如今依旧在困境中徘徊不前。
事实上, 老李所遭受的状况并非是单独的事例。有着太多与之相仿的故事, 是我于圈子当中听闻的。有不少人都这样认为, 肿瘤细胞株难道不就是一种实验的工具吗? 购买下来使用便可以了, 哪里会存在诸多的讲究。然而实际的情形是, 一旦细胞株出现了问题, 那么接连后续的所有实验都成为了在浪费时间, 而时间于科研里边可是最为值钱的事物。
肿瘤细胞株为什么容易出问题？
众多人并不知晓, 在市面上所流通的细胞株里头, 存有相当一部分是存在交叉污染或者错误鉴定情况的。这绝非是危言耸听, 有国际细胞库生成的数据表明, 早期进行建系的细胞当中有将近三成是存在身份方面问题的。纵然现下已然拥有了STR鉴定技术, 可仍然拥有不少小供应商正在借此浑水摸鱼。
老王过后归纳出了一句格外粗俗但格外正确的话语, 那便是, 你购置肿瘤细胞株, 所购置的并非仅仅是细胞, 而是它的身份标识。
怎么避免买到有问题的肿瘤细胞株？
目前老李拿货的渠道仅为, 权威细胞库的二级代理商, 有良好信誉的第三方平台, 或者直接与原代建系的实验室取得联系。他会要求每一批货物都附带最新的STR图谱, 同时自己再花费几百元进行一次第三方鉴定。
他说：“别怕麻烦，麻烦一次，省心两年。”
肿瘤细胞株到手后还需要做什么？
这大约算是老李最为深刻的教训了。细胞拿到手, 可并非拆开便能够使用的。首先第一步, 要先在低代次进行复苏操作, 接着观察其形态是不是正常, 这是其一。接着来到第二步, 需进行支原体检测, 只有检测结果为阴性的情况下才可以接着往下进行, 这是其二。随后是第三步, 要抽取DNA送去做STR鉴定, 在跟上官方数据库比对并确认无误过后, 才能够去开展正式的实验, 这是其三。
他当下所在的团队存在一项未形成文字记录的规定, 新购置的肿瘤细胞株, 在最初的两周期间, 所要进行操作的仅有一件事情, 那便是开展质控工作。倘若质控的结果不合乎相关标准, 那么任何人都不可以运用它去开展实验。
肿瘤细胞株用久了会变吗？
后来老李才意识到这个, 细胞在长时间传代进程里, 基因表达谱会漂移, 甚至于出现染色体变异, 他先前用同一批MCF - 7乳腺癌细胞株做了半年, 结果前后两次实验的结果不一致, 排查了好长时间才发觉是细胞在传代时发生了表型改变。
老李目前所采取的做法是，针对每一批细胞, 都要去建立种子库以及工作库, 并且使用的代次不会超过10代, 一旦达到这个代次, 便开启新的管。他声称这一办法是从一位老教授那里学到的, 尽管如此做增加了工作量, 但是数据的可重复性却提升了相当大的幅度。
究其根本, 肿瘤细胞株乃是肿瘤研究最为根基且最为关键的资源, 老李耗费了大半年的时间, 半途绕了些弯路, 才切实领悟到这个道理, 他时常对那些新入职的同事讲: “你倘若想要把实验完成得出色, 首先得学会去敬重你的细胞株。”这话看着直白但道理却很实在。
要是你同样在开展肿瘤相关的研究事宜, 那么在购买肿瘤细胞株之前, 不妨先自行询问一下自己: 它本身的身份可不可以信赖? 它整体的健康状态有没有进行确认呢﹖你计划以怎样的方式去管理它的代次? 把这三个问题思考明白的话, 是能够节省下来一大笔时间以及经费的。
