去年秋天, 于苏州工业园区, 有一个实验室, 在那儿, 我的老朋友老张, 差一点就被一个项目给逼疯了。
从事研发主管工作的老张, 任职于一家生物科技公司, 负责一个新药候选分子的药代动力学评价, 该项目时间紧迫、任务繁重, 甲方催促得如同讨债一般, 老张带领的手下几个新来的人, 每天加班直至凌晨时分, 却依旧无法解决样品检测的重复性问题。
那天夜里, 老张致电于我, 其嗓音沙哑仿若砂纸一般。他讲, 客户提出要检测血浆之中的药物浓度, 然而样品数量极少, 每一只小鼠仅仅能够采集到几十微升的血液。运用常规的酶标仪检测办法, 样本的体积根本达不到要求, 经过稀释之后信号又低至无法观察。最为关键的是, 重复检测了三批数据, CV值也就是变异系数, 全部都超过了30%, 甲方当下气得拍了桌子。
彼时, 我于电话之中向他举荐了一个物品, 此物品乃是微量法检测试剂盒。老张心怀疑虑, 言称市面上存在诸多宣称“微量”的试剂盒, 然而实际运用起来皆不尽如人意, 要么是灵敏度有所欠缺, 要么是操作过于繁杂。
我让他别急着下结论，先试一次再说。
微量法检测试剂盒到底怎么用
在老张所负责的实验室当中, 其主要开展的工作是酶联免疫吸附测定, 传统的用于该测定的试剂盒, 所需要的样本量至少得达到100微升, 然而, 老张所拥有的小鼠血浆样本, 仅仅只有20微升。要是按照以往所采用的思路来进行操作, 那么样本根本就是不够用来开展相关工作的。
不同于其他, 微量法检测试剂盒有着全然不同的设计思路, 选用具有高亲和力的捕获抗体以及更为灵敏的检测底物, 在相同信噪比情形下, 样本使用量能够压缩至传统方法的五分之一, 甚至是十分之一, 老张所挑选的这款试剂盒, 单次检测最少仅需10微升样本, 恰好完美契合他的需求, 起到了很好的匹配作用。
涉及操作方面, 老张仅用了半个小时去培训新人, 便将步骤讲解清楚了: 先是加样, 接着进行孵育, 随后开展洗涤, 再接下来加入检测抗体, 之后再次进行孵育, 然后又再次洗涤, 再之后加入底物显色, 随后终止, 最后读板。与普通试剂盒存在的最大差异之处在于, 每一步骤的孵育时间更为简短, 而且洗涤的次数更为精确, 这是由于样本量较少, 所以反应动力学更快。
老张讲, 头一回跑完标准曲线, R²值一下子就到了0.998, 那时他差点把咖啡溅射到电脑屏幕上。
微量法检测试剂盒灵敏度高不高
老张之前最担忧这个问题, 他害怕样本量如果比较小, 那么与此同时信号强度也会变小, 进而低浓度的样品根本就测不出来。
然而事实上, 微量法检测试剂盒的关键技术在于提升灵敏度, 其采用的底物并非传统的TMB显色液, 乃是新一代的化学发光或是荧光底物, 检测限能够低至皮克级别。老张所做的那个项目, 血浆药物浓度范围处于0.1至50纳克每毫升, 使用传统试剂盒稀释之后根本无法测到低浓度点, 然而换用了微量法试剂盒后, 所有浓度点均落在标准曲线线性范围之内。
老张特意做了加标回收实验, 他于已知浓度的小鼠血浆之中, 加入三种具备不同浓度的标准品, 回收率分别是百分之九十八点七、百分之一百零一点二以及百分之九十九点四 , 此数据发送至项目群里, 甲方那边径直回了三个大拇指。
微量法检测试剂盒性价比怎么样
老张算计过一笔账, 传统试剂盒每次检测所需样本为100微升, 他所进行的实验设计为每组8只小鼠, 于每个时间点进行采血, 时间点共有8个, 再加上标准品以及质控, 一轮实验所需检测次数为200次。传统试剂盒是以200次包装售卖, 其价格大概在3000元左右。然而传统方法因样本不足, 他不得不增加动物数量或者合并样本, 实验成本巨大而且伦理压力也很大。
同样是200次包装的微量法检测试剂盒, 其价格稍高些, 为3500元的。然而, 因仅需10微升样本, 故而他能够采用相同数量的动物完成整个时 间曲线, 甚至还可预留备份样本用于其他指标。事实上, 将动物采购费、饲养费、人工费加在一起, 一轮实验至少节省了两万块。
老张的原话是：“以前觉得贵，现在才明白那叫省钱。”
微量法检测试剂盒操作方便吗
在操作流程方面, 老张所带领的团队仅仅耗费三天时间便已然能够完全熟练上手。相较于传统试剂盒而言, 微量法的各个步骤显得完全相同, 唯一存在差异的是, 加样量由原本的100微升转变成为了10微升。实验室之中的排枪以及八通道移液器均可正常使用, 并不需要额外进行仪器的购置。
唯一要留意的是加样精度, 10微升这一加样量, 对移液器准确性要求更为高些, 老张特意让组员用校准过的移液器去操作, 并且每次加样之前都要做一回预湿。另外, 孵育时的密封性同样要予以注意, 因样本量小, 蒸发对于结果影响更为大些。老张在孵育箱之中放置了湿盒, 圆满解决了这个问题。
他讲, 最为大的意外所得是实验周期给缩短了。传统试剂盒每一步的孵育一般而言需要60分钟, 微量法鉴于反应体系更为小些, 扩散速率更加快些, 孵育时间被缩短至30分钟。整个实验开展下来, 从早上八点起始, 下午两点便能够得出结果, 以往要忙到晚上八九点。
微量法检测试剂盒适合哪些实验
老张归纳出了几类格外适配的场景, 其一, 是临床前药代动力学的研究, 特别是针对小鼠、大鼠这类小动物而言, 其采血量极为有限, 进而在这方面有着特殊需求, 其二, 是细胞上清里细胞因子的检测, 尤其是原代细胞或者有限样本的情况, 通常仅有几十微升, 其三, 是脑脊液、眼房水、关节液等珍贵样本, 这些样本量少且不可再生, 其四, 是高通量筛选, 微量法能够在一块96孔板上同时检测更多指标, 以此节省时间和耗材。
老张接下来自己开发出来一个有着多项指标联合检测的方案, 他把相同的样本划分成了三份, 与此同时对药物浓度、炎症因子以及肝功能指标展开检测 在所有数据源自同一只动物的情况下 极大程度地提升了数据的相关性与说服力。
微量法检测试剂盒数据稳定性如何
最让我佩服老张的一点在于, 他做事极其较真。他运用同一批微量法检测试剂盒开展了三批独立实验, 每一批都涵盖标准品、质控品以及实际样品, 并且所有操作人员各异, 实验日期也不一样。对这三批数据进行合并分析后, 批内CV低于8%, 批间CV低于12%, 这完全契合行业标准。
他运用试剂盒检测了冻存达三个月之久的小鼠血浆样本, 将其结果和新鲜样本的结果予以对比, 偏差处于5%以内。这表明, 老张能够一次性采集完所有样本, 把样本进行冻存, 做到集中检测, 从而大幅削减实验批间误差。
在甲方进行最终验收这个时候, 对于数据所具备的完整性以及可靠性, 呈现出极为满意的状态。老张负责的那个项目, 不但不存在延期的情况, 而且还比规定时间提前了两周, 就提交了最终报告。在公司领导召开的季度会议之上, 特意点名对他进行了表扬, 并且年终奖直接实现了翻倍。
后来老张邀我用餐, 于一家湘菜馆, 他点了满满一桌子菜肴。酒过三巡之际, 他脸面泛红讲道, 则若不是那个微量法检测试剂盒, 他或许已然被甲方投诉至离职了。我表示没那样夸张, 他摇头称, 你并不知晓, 那项目公司投入了六百万, 要是砸在我手中, 我卷铺盖走人是小事, 整个管线的进度都得被推迟半年。
我向他询问, 当下组里是否仍在使用这个试剂盒。他给予回应谓, 已然成为了标准配置, 但凡所有涉及微量样本的检测, 均已全部改用微量法。近期公司研发部进一步采购了一批全新的微量法试剂盒, 预备推广至其他项目组。
属于老张的微信头像, 原本是呈现出一副苦着脸模样的柴犬, 现在却转变为一只咧着嘴展现笑容的萨摩耶。
