朋友老张, 于一家生物公司担任研发主管, 手下带领着四五个人, 专门对基因表达量检测这一方面负责。上个月, 他与我一同喝酒, 此时他眉头紧皱, 达到眉毛聚拢的程度能够夹死苍蝇, 倾诉称自己快要被qPCR实验折磨至精神崩溃的状态。他手中所使用的试剂盒, 在灵敏度方面呈现出时而高时而低的不稳定状况, 其扩增曲线常常出现拖尾的现象, 溶解曲线还不时地冒出双峰模样, 每次所跑出的结果, 连他自己都不敢相信, 更不要说拿给客户去查看了。
老张讲,他们实验室一个月的时间里,光是耗材就要花费掉好几万的资金,然而数据的质量却很差劲,项目的节点也被一而再再而三地拖延,大老板已经为此发过两次火了。他私底下跟我倾诉,别的团队所使用的染料法qPCR试剂盒得出的数据十分完美,而自己这边进行的实验却如同开启盲盒般随意,完全是依靠运气才能得出结果。我询问他是否更换过试剂盒,他面带苦笑地表示,已经更换了两三个不同的牌子,可遇到的问题仍然未得到解决。
那时, 我恰好在朋友圈瞧见一篇技术推文，其讲述的是新一代染料法qPCR试剂盒怎样经由优化聚合酶以及缓冲体系, 从根源上削减非特异性扩增, 提高信噪比。我顺手将其转给了老张, 还开玩笑问说看要不要尝试一下这个? 他没把这当回事, 随手回复了一句“再说吧”。
两周之后, 事情出现了转折。老张接手了一个紧急项目, 这个项目是要对一批临床样本进行基因差异分析, 时间紧迫, 而且样本量极大。他鼓足勇气, 用原来的试剂盒开展了一轮预实验。然而, 结果显示Ct值标准差极为离谱, 就连内参基因都不稳定。团队里的小朋友双眼因加班变得通红, 可数据仍然无法使用。
老张着急了, 在半夜的时候给我打了电话, 询问我上次所推的那个试剂盒究竟靠不靠谱。我表示我根本没有资格去评价, 你自己去拿一管试试看不就能够知道了。他在第二天一大早便联系了供应商, 对方表现得倒是很爽快, 把试用装寄了过来。
老张跟我讲, 他那时实际上挺忐忑不安的, 缘由是早前吃过太多亏, 害怕又是讲得无比美妙、使用起来却惨不忍睹。然而试用的结果使他大为吃惊。同一批样本, 采用新染料法qPCR试剂盒跑出来的扩增曲线极为平滑宛如教科书上所示的图那般, 溶解峰单一且干净, Ct值在三个重复之间波动幅度不超过0.3。他跟我讲那种感觉就仿佛开了挂一样, 以往两三天才能够整理好的数据, 如今一天就能出具报告。
此后老张再度将其用于多次验证行为, 涵盖低丰度基因的检测事项以及高GC含量模板的扩增事宜, 所呈现的状况均极为稳定。他特地针对这几个月的实验记录展开对比操作, 发觉在使用新盒子之后, 实验重复率由原本的大约60%径直提升至95%以上。按照他的表述, 终于能够安心地把结果传发给客户了, 无需再暗自补做一回以进行确认。
上上个月我遭遇的老张三三四个月又相遇遇到了, 他整个的人的精神状态头完全都不一样有了变化了。他讲说现在团队里的那几个年轻的男子干活做事也变得主动积极了起来, 缘由是因为实验的成功概率比率高了, 不需要反复地进行返工重新做了。他还专门特意地计算核算了一笔账目, 尽管单个试剂盒的采购购买成本花费比之前略微高了那么一些, 然而因为重复实验的次数少了, 整体的耗材材料和人力人工成本反而反倒降低下降了两三成。
我向着他去询问, 是不是从今往后就一直执着于死磕这个品牌了呢? 他摆动着手示意, 表示并非一定要认准这牌子, 重点在于要挑选正确的技术路线。染料法qPCR试剂盒这样一种物品, 其核心是在反应体系所具备的稳定性以及抗干扰能力之上。以前的试剂盒在引物二聚体抑制、模板杂质耐受这些层面做得并不够出色, 稍微存在一点儿杂质或者引物设计未达到完美匹配的状况, 那么结果就会失败了。然而他现在所使用的这一款, 恰好是将这些不足之处给弥补上位了。
老张跟我分享了一个细节, 说他们搞的一个项目, 要检测的是组织样本里某个低表达的基因, 这个样本来源繁杂, RNA质量高低不一, 要是搁以前, 这样的样本就基本废掉了, 跑出来全是杂乱无章的曲线, 然而用了新试剂盒后, 竟然获得了可用的数据, 并且和大样本统计结果契合得相当好, 他很是感慨地讲, 有时并非实验难做, 而是工具没选好。
我向他询问, 要是当下让他给同行去推荐染料法qPCR试剂盒, 他究竟会怎样表述呢, 老张思索了一番, 相当认真地回应了一句, 别仅仅盯着价格以及品牌, 得先弄清楚它可不可以帮你节省时间、减少返工, 实验做得多了你才能发觉, 可靠的试剂盒并非是最便宜的, 然而肯定会是最让人省心的。
说实在话, 我撰写这篇文章, 并非是要为谁家去做广告。老张的经历致使我觉得, 好多从事分子检测的朋友或许都被困在了同一个困境之中, 那便是试剂盒使用了好些年, 碰到问题时的首要反应是去调整实验操作, 然而却未曾想到根源上的试剂自身很可能才是关键限制因素。染料法qPCR试剂盒的更新换代速度实际上是挺快的, 有时更换一个试剂盒, 远比耗费几个月去优化流程更为有效。
倘若你也正为qPCR实验的数据稳定性而发愁, 那就不如学老张那般, 寻个可靠的供应商去索要一份试用装, 亲自跑上一轮来进行对比。实验得出的结果不会说谎, 哪个盒子能够让你的曲线呈现平滑状态、Ct值保持稳定、具备良好的重复性, 那便是你所需要找寻的答案。毕竟做实验这件事情, 最后的比较并非是谁所使用的试剂盒牌子更具知名度, 而是谁获取到的数据更为真实。
