老张的“细胞梦”从实验室开始
我在生物技术圈认识的老张, 是我相识快十年的朋友, 当年他和我一起从学校毕业, 毕业后他进入了华东一家知名的生物科技公司, 在这家公司里他负责细胞生物学研发, 他的性格具有踏实的特质, 做事表现入微细致, 之后他转入一家初创企业并担任技术负责人的工作, 去年夏天的时候, 他承接了一个有关肿瘤微环境研究的项目, 这个项目的核心材料是原代细胞。
最开始的时候, 老张满怀信心, 他认为, 自己从学校踏入职场, 所接触过的细胞类型, 起码有十来种, 原代细胞虽说珍贵, 可是依照标准操作流程去做, 应该不会出现太大的问题。
为什么说原代细胞那么难搞？
老张首个实验定在了2025年9月初, 地点是公司超净工作台前。他预先从合作方取得一批人源原代肝细胞, 依照过去经验, 进行解冻操作, 加以离心处理, 尝试接种, 每一步均小心翼翼。然而三天后, 显微镜下所见景象令他内心凉了大半截, 细胞贴壁率超乎寻常低, 存活率不足40%。
后来他跟我进行复盘的时候讲, 原代细胞与传代细胞系绝对算是毫不相干的两类事物, 传代细胞系好似“经过驯化的家畜”, 具有耐受且适应性良好的特性, 然而原代细胞却是“野生保护动物”, 对于环境展现出极为敏感的状态 , 温度有所波动, pH值出现偏差, 甚至培养基的批次存在差异, 均能够致使它们产生“情绪反应”。
原代细胞培养的常见误区有哪些？
那些日子里头, 老张差不多天天都在查找资料, 还向同行询问情况, 他发觉, 好多人和他有着同样的状况, 对原代细胞培养涉及的复杂程度估计不足, 最为频繁出现的错误认知包含着: 。
培养基配方不是万能的
有些同事, 直接用传代细胞的培养基去养原代细胞, 结果细胞形态变得异常, 甚至还出现了自发分化的情况。老张尝试了好几种进口培养基, 最后才找到了一个专门针对原代肝细胞的配方, 这个配方里面添加了特定的生长因子以及激素组合。
消化时间控制不当
老张有过一回尝试要用胰酶去消化贴壁的原代细胞, 那次所花费的时间略微长了那么一点儿, 细胞的表面受体就遭到破坏了, 所以就直接致使后续接着进行的实验归于失败状态。后来他转而使用TrypLE这种相对更温和些的对细胞进行消化的液体, 并且严格把控时间使其处于两分钟以内。
传代次数被高估
具有有限增殖能力的原代细胞, 老张起初认为能够传至8到10代, 然而到了第3代时, 有一系列变化出现, 那就是细胞已然呈现出衰老迹象, 具体表现为细胞体积增大以及增殖停止。而那批实验数据仅能用前两代的细胞来开展, 如此一来成本即刻增长了数倍。
原代细胞分离技术到底靠不靠谱？
2025年11月, 老张接到了一个任务, 这个任务更棘手, 是什么任务呢, 是要从小鼠肿瘤组织当中分离出原代肿瘤细胞。这个项目时间紧迫, 客户要求在一个月之内交付验证数据。
他尝试了组织块贴壁这一方法, 但杂质细胞数量过多, 而纯化之后的纯度仅仅只有大概70%。他又去尝试了酶消化法, 使用胶原酶IV型进行消化, 消化时长为三小时, 虽然最终获得了单细胞悬液, 然而活力检测所呈现的结果表明只有60%的细胞处于存活状态。
那段时间, 老张几乎将公司附近的生物试剂供应商逐一联系了个遍, 之后, 经由一位老同学的推荐, 找到了一家专攻原代细胞分离试剂盒的公司, 那个试剂盒之中装着优化好的酶混合物以及纯化柱, 首次使用便把细胞纯度提升到了95%以上,活力也保持在85%左右。
原代细胞的储存和运输容易忽略什么？
老张所负责的工程项目进展至2026年3月阶段, 此阶段需从身处北京的一家存在合作关系的医院那里接收一批临床样本之内的原代细胞, 对方采用干冰用以寄送这批细胞, 然而最终因为物流运输方面产生延误情况, 当货物到达之时那干冰已然已经挥发得几乎一点儿不剩了, 细胞所处的温度上升到了零下40度往上, 如此一来细胞的存活率显著地受到影响, 大打折扣了。
老张讲, 原代细胞储存以及运送设有两个重要之处, 其一待采用专门的冻存液体, 当中涵盖DMSO与血清, 如此可保护细胞膜于冻融进程里不会遭受破坏, 其二运输温度务必要维持在零下80度之下, 最优是运用液态氮干式运输罐而非平常干法制作的冰。
他特意制定了内部SOP, 规定所有接收的细胞得来货之后30分钟内做完复苏操作。且要记录每一批细胞的冻存时间, 以及复苏存活率、贴壁效率等数据。这套流程后来成了他们公司的标准操作手册。
原代细胞应用前景到底怎么样？
经历大半年探寻, 老张所在团队于2026年6月最终疏通了全部原代细胞分离流程, 完成了原代细胞培养流程, 并达成了原代细胞鉴定流程。他们凭借自身制备的原代肝细胞做完了药物代谢毒理实验, 其数据为一家药企所采用, 合同金额超出200万。
老张如今时常跟新人讲, 原代细胞虽说养起来困难, 然而其价值是无可被替代的。它留存了体内细胞的真实表型以及代谢功能, 特别是在肿瘤研究、个性化医疗、药物筛选这些领域, 传代细胞系根本无法与之相比。
近期, 他仍在预谋购置一台自动化细胞培养系统, 借此使原代细胞的培养流程得以标准化, 进而削减因人为操作所引发的变异。他宣称, 在未来的三至五年时间里, 原代细胞技术必定会从实验室迈向工业化应用领域, 倘若谁率先掌控核心技术, 那么谁便能够立足于行业风口处。
