Caco - 2结肠腺癌细胞, 是源于人类结直肠腺癌的上皮样细胞系, 于生命科学领域被广泛运用, 它的独特之处在于, 在常规培养条件下能自发推进肠上皮样分化, 构建紧密连接以及刷状缘微绒毛结构, 所以在药物吸收、转运而且营养代谢等方面的研究里, 常常被视作肠道屏障的体外模型, 对刚接触此细胞系的研究者而言, 弄明白它的根本特性、培养要点与常见误区, 经常可使后续实验少走诸多弯路。

Caco-2细胞培养难题有哪些

令人最感头疼难办的培养Caco - 2细胞的问题, 一般常常也就是其生长速度倾向于缓慢以及分化所需的周期极为漫长。自进行传代后直到彻底分化从而形成具有极性的单层, 差不多往往是需要大概21天左右。这对于实验的排期毫无疑问是一次颇具考验的挑战。有着诸多实验室在初始阶段会出现对细胞状态作出不正确判断的情形。觉得生长得较慢那就是发生污染致使的或者是培养基方面出现了问题。实际上本质上这可是它这种细胞所具有不变的固有属性了。

另外一个平常会碰到的棘手困难是, 细胞易于出现自发分化的状况了, 进而致使传代以后其形态不再均匀一致。要是持续培养的时长过长, 那么部分区域会呈现出类似肠上皮那样的隆起结构, 这些区域内的细胞最终常常已经丧失了优良的传代能力。所以呀, 把控好恰当的传代密度以及时机就显得特别关键了, 通常建议在细胞融合度达到百分之七十至百分之八十的时候开展传代操作, 防止让细胞长时间处于过于密集的状态。

进行培养基的挑选也会径直对细胞状态产生影响, 平常所运用的高糖 DMEM 要搭配 10%跟 20%之间的胎牛血清, 血清质量的起伏会对细胞贴壁率以及增殖速度造成显著影响, 有些实验室为了求取稳定, 会预先挑选一批血清留待专门使用, 这真实是削减批次差异的有效举措。

Caco-2细胞怎么正确传代操作

传代操作的关键要点在于对消化环节做到精确掌控, Caco - 2细胞贴壁稳固, 通常情况下, 胰蛋白酶用于其消化所需的时长会比普通细胞系要更久一点, 然而要是过度进行消化, 就极易对细胞膜表面的关键蛋白造成损害, 建议运用低浓度胰酶搭配EDTA来实施消化, 并且在显微镜下面实时留意细胞形态的改变, 当细胞间隙变大、细胞趋向圆形但还没有完全漂浮起来的时候, 要及时停止消化。

后续实验受接种密度影响颇为显著。若用于常规传代维持, 分瓶可依照1比4至1比6的比例；要是为转运实验准备细胞模型, 就得把细胞以较高密度接种至Transwell小室, 通常每平方厘米较建议接种1×10的5次方个细胞, 如此才可于合理时间里形成完整的单层屏障。

在培养进程里, 要尽可能地削减那些并非必要的挪动以及震动, 毕竟机械刺激会对细胞单层的完整性造成影响。进行换液操作时, 沿着容器壁缓缓地添加预先加热好的培养基, 防止直接对细胞表面进行冲刷, 这些细微之处即便看起来并不显眼, 然而却常常决定了后续跨膜电阻值究竟能不能够达到理想的范围。

对于才拿到这个细胞系的研究者而言, 建议先耗费两到三周工夫熟悉其生长节律, 记录不同密度状况下的形态变化, 而非急切地着手展开正式实验。唯有摸透了这细胞系的习性特点,后续所得到的数据才会更具可靠性。Caco-2细胞的培养是不存在捷径可走的, 耐心以及规范的操作就是最为理想的办法。