ELISA酶联免疫吸附实验免疫分析是一种利用特定抗体与抗原或半抗原发生的高选择性高特异性识别和结合原理,对待测抗体或者抗原进行分析测定的方法,酶联免疫吸附分析(下称ELISA)是免疫分析的一种,分三个部分组成:免疫识别,信号输出和数据处理。
ELISA试剂盒标本保存,在ELISA试剂盒实验中是非常重要的。标本保存不当可能会导致实验结果异常,如颜色背景深、非特异性染色、标准曲线不佳等问题。以下是一些解决这些问题的方法:
1. 颜色背景深/非特异性染色
1) 充分清洗酶标板:确保每个微孔的洗涤液量一致,清洗后用力按压在吸水纸上,重复2-3次。
2) 避免污染:检查试剂,避免错加其他试剂;操作时更换吸头,使用移液器减少污染。
3) 控制孵育和显色时间:严格按照说明书控制时间,避免过长。
4) 稀释抗体:如果抗体浓度过高,按要求稀释后再使用。
5) 保存底物避光:底物应避光保存,避免曝光。
6) 正确使用滤镜片:校正相应波长后再读取吸光值。
2. 所有孔均无明显颜色
1) 检查试剂:确认试剂盒内各组分正确配制和使用。
2) 确认酶标物状态:确保容器不含酶抑制剂,洗液容器已清洗。
3) 检查操作步骤:严格审阅操作步骤,确保无遗漏。
4) 保存条件:在有效期内使用,按说明书保存条件。
5) 平衡温度:所有试剂和样品应室温平衡30分钟。
6) 控制孵育时间:确保足够反应时间。
7) 控制洗板次数和浓度:按说明书操作,避免过度洗涤。
8) 检查滤光片:确认读取吸光值时使用的滤光片正确。
3. 标准曲线不佳
1) 标准品配制:严格按照说明书配制标准品。
2) 储存条件:按照说明书条件保存,避免重悬组分室温放置过久。
3) 混匀样品:加入多种样品后充分混匀,防止不溶物。
4) 正确洗板:洗涤液注满孔中,但不溢出,确保洗板机无遗漏,洗涤充分。
5) 避免残留:加液时吸头尽量沿孔壁加液,避免孔壁残留液体过多。
6) 避免污染:吸取不同试剂更换吸头,配置不同组分使用不同器皿。
4. 样本保存异常
1) 避免反复冻融:样本保存时避免反复冻融,影响蛋白等分子。
2) 分装保存:标本收集后及时分装,-20℃或-70℃保存。
3) 避免细菌污染:采集及分离过程注意无菌操作,避免细菌分解蛋白。
4) 平衡温度:冷冻样本恢复室温时轻柔混匀,避免剧烈振荡。
通过上述方法,可以有效解决ELISA实验中由于标本保存不当引起的异常现象,确保实验结果的准确性。