羟自由基清除能力测定试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理：
H2O2/ Fe2+ 通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体12 mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
样品的制备：
操作步骤：
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空白管 |
对照管 |
测定管 |
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工作液（µL） |
250 |
250 |
250 |
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混匀，防止局部颜色过浓 |
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样品（µL） |
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50 |
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试剂四（µL） |
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50 |
50 |
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H2O（µL） |
100 |
50 |
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混匀，37℃保温60min，8000g 25℃离心5min，吸取200μL于96孔板中测定536nm处吸光值，空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。 |
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注意：空白管和对照管只需测定一次。
计算公式:
羟自由基清除率 D% =（A测-A对）÷（A空-A对）×100%
A空、A对、A测：空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项:
为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。
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资料/datasheet
