β-木糖苷酶（β- xylosidase）测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清待测。
细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
液体：直接检测。
测定操作表：
|
|
对照管 |
测定管 |
|
酶液（μL） |
40 |
40 |
|
试剂一（μL） |
|
10 |
|
试剂二（μL） |
80 |
70 |
|
混匀，45℃水浴20min |
||
|
试剂三（μL） |
80 |
80 |
|
混匀，静置5min，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。 |
||
β-木糖苷酶活性计算公式：
标准曲线：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4时每毫克蛋白1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷（V样×Cpr）÷T×1000
= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4时每104个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷V样×V样总÷细胞数量（万个）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷V样÷T×1000
=11.34×(ΔA-0.0011)
V样总：加入提取液体积，1mL； V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值ΔA
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4时每毫克蛋白1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反总÷（V样×Cpr）÷T×1000
= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鲜重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4时每104个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反总÷V样×V样总÷细胞数量（万个）÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反总÷V样÷T×1000
=22.68×(ΔA-0.0011)
V样总：加入提取液体积，1mL； V反总：反应总体积，0.12mL；V样：反应中样品体积，0.04mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA控制在0.01-1范围内，若ΔA大于1，可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
扫描二维码
扫描二维码
资料/datasheet
