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共价结合型果胶(CSP)含量测试盒(比色法)

试剂别名:
CAS NO.:
分 子 式:
分 子 量:

共价结合型果胶(CSP)含量试剂盒说明书

                                 微量法 100管/48样

正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量最丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。

测定原理:

利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP),采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在530 nm处有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体100mL× 1瓶,4℃保存。

试剂二:液体100mL× 1瓶,4℃保存。

试剂三:标准液1mL× 1支,4℃保存。

试剂四:液体5mL× 1瓶,4℃保存;

样品的前处理: 

  1. 细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
  2. CSP的提取:称取烘干的CWM 3mg,加入1mL试剂二,充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆,或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm处,蒸馏水调零;试剂三和试剂四37℃预热10min以上;

2、操作表:

试剂名称(µL)

空白管

标准管

对照管

测定管

待测样本

 

 

50

50

试剂三

 

50

 

 

蒸馏水

50

 

50

 

试剂四

50

50

 

50

  混匀  

浓硫酸

400

400

400

400

混匀,95℃水浴5min后,冷却至室温,取200µL 至微量石英比色皿或96孔板中,530nm处读取吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释10倍或20倍)。空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。

CSP含量计算:

CSP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数

C标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL; W:样本干重,g。

注意:最低检测限为50μg /g 干重 

 

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